(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210725237.0 (22)申请日 2022.06.24 (71)申请人 中国医学 科学院北京协和医院 地址 100730 北京市东城区王府井帅府园1 号 申请人 领航基因科技 （杭州） 有限公司 (72)发明人 杨启文　喻玮　贾沛瑶　朱盈　 夏江　朱海涛　李锋超　 (74)专利代理 机构 北京英创嘉友知识产权代理 事务所(普通 合伙) 11447 专利代理师 耿超 (51)Int.Cl. C12Q 1/689(2018.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12Q 1/04(2006.01)C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种用于检测普罗威登斯菌的核酸试剂和 数字PCR试剂盒 (57)摘要 本公开涉及一种用于检测普罗威登斯菌的 核酸试剂和数字PCR试剂盒， 该核 酸试剂包括SEQ  ID NO.1‑6所示的引物和SEQ  ID NO.9‑11所示的 探针。 本公开建立了同时检测斯氏普罗威登斯 菌、 产碱普罗威登斯菌和雷氏普罗威登斯菌的检 测体系； 检测体系中含有外源内控作为对照， 能 够对检测过程进行质控； 检测结果具有良好的灵 敏度和特异性。 权利要求书1页 说明书9页 序列表4页 CN 114807403 A 2022.07.29 CN 114807403 A 1.一种用于检测普罗威登斯菌核酸的核酸试剂， 其特征在于， 该核酸试剂包括SEQ  ID  NO.1‑6所示的引物和SEQ  ID NO.9‑11所示的探针。 2.根据权利要求1所述的核酸试剂， 其 中， 所述SEQ  ID NO.9所示的探针中， 5 ’端核苷酸 标记有FAM发光基团， 3 ’端核苷酸标记有MGB淬灭基团； 所述SEQ ID NO.10所示的探针中， 5 ’端核苷酸标记有VIC发光基团， 3 ’端核苷酸标记有 MGB淬灭基团； 所述SEQ ID NO.11所示的探针中， 5 ’端核苷酸标记有CY5发光基团， 3 ’端核苷酸标记有 MGB淬灭基团。 3.根据权利要求1所述的核酸试剂， 其中， 所述核酸试剂中还包括SEQ  ID NO.7‑8所示 的引物和SEQ  ID NO.12所示的探针； 其中， 所述SEQ  ID NO.12所示的探针中， 5 ’端核苷酸标记有A425发光基团， 3 ’端核苷酸 标记有BHQ1淬灭基团。 4.根据权利要求1所述的核酸试剂， 其中， 所述普罗威登斯菌包括雷氏普罗威登斯菌、 斯氏普罗威登斯菌和产碱普罗威登斯菌中的至少一种。 5.一种用于检测普罗威登斯菌的数字PCR试剂 盒， 其特征在于， 所述试剂盒包括核酸试 剂和数字PCR扩增试剂， 所述核酸试剂为权利要求1~4中任意一项所述的核酸试剂。 6.根据权利要求5所述的数字PCR试剂盒， 其中， 所述数字PCR扩增试剂包括： 阳性对照 DNA模板、 DNA聚合酶、 dNTP和反应 体系缓冲液中的至少一种。 7.根据权利要求6所述的数字PCR试剂盒， 其 中， 所述阳性对照DNA模板为编码LexA基因 的DNA或编码LexA基因的DNA的片段。 8.根据权利要求7所述的数字PCR试剂盒， 其 中， 所述编码LexA基因的核苷酸序列如SEQ   ID NO.13、 14、 15中的任意 一项所示。 9.权利要求1~4任意一项所述的核酸试剂在制备用于检测普罗威登斯菌的数字PCR试 剂盒中的用途。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114807403 A 2一种用于 检测普罗威登斯菌的核酸试剂 和数字PCR试剂盒 技术领域 [0001]本公开涉及生物技术领域， 具体地， 涉及用于检测普罗威登斯菌 的核酸试剂和数 字PCR试剂盒。 背景技术 [0002]普罗威登斯菌， 与肠杆菌科的一般定义符合， 兼性厌氧， 属革兰氏阴性直杆菌， 以 周生鞭毛运动， 不出现集群。 氧化脱氨苯丙氨酸和色氨酸。 分离于腹泻大便、 尿道感染、 伤 口、 烧伤和菌血症标本。 普罗威登斯菌是条件致病菌， 能引起腹泻， 肠道外感染和尿道感染 等疾病。 常见的普罗威登斯菌有产碱普罗威登斯菌、 雷氏普罗威登斯菌、 斯氏普罗威登斯菌 等。 但是目前尚未研制出能够同时检测多种普罗威登斯菌的检测试剂盒。 发明内容 [0003]本公开的目的是提供一种特异性好和灵敏度 高、 快速、 准确地检测普罗威登斯菌 的核酸试剂及数字PCR试剂盒。 [0004]为了实现上述目的， 本公开提供一种用于检测普罗威登斯菌 的核酸试剂， 该核酸 试剂包括SEQ  ID NO.1‑6所示的引物和SEQ  ID NO.9‑11所示的探针。 [0005]可选地， 所述SEQ  ID NO.9所示的探针中， 5 ’端核苷酸标记有FAM发光基团， 3 ’端核 苷酸标记有MGB淬灭基团； 所述SEQ ID NO.10所示的探针中， 5 ’端核苷酸标记有VIC发光基团， 3 ’端核苷酸标 记有MGB淬灭基团； 所述SEQ ID NO.11所示的探针中， 5 ’端核苷酸标记有CY5发光基团， 3 ’端核苷酸标 记有MGB淬灭基团。 [0006]可选地， 所述核酸试剂中还包括SEQ  ID NO.7‑8所示的引物和SEQ  ID NO.12所示 的探针； 可选地， 所述SEQ  ID NO.12所示的探针中， 自5 ’端核苷酸标记有A425发光基团， 3 ’ 端核苷酸标记有BHQ1淬灭基团。 [0007]可选地， 所述普罗威登斯菌包括雷氏普罗威登斯菌、 斯氏普罗威登斯菌和产碱普 罗威登斯菌中的至少一种。 [0008]本公开还提供了一种用于检测普罗威登斯菌的数字PCR试剂盒， 所述试剂盒包括 核酸试剂和数字PCR扩增试剂， 所述核酸试剂为本公开第一方面 提供的核酸试剂。 [0009]可选地， 所述数字PC R试剂包括： 阳性对照DNA模板、 DNA聚合酶、 dNTP和反应体系缓 冲液中的至少一种。 [0010]可选地， 所述阳性对照DNA模板为编码LexA基因的DNA或编码LexA基因的DNA的片 段。 [0011]可选地， 所述编 码LexA基因的核苷酸序列为如SEQ  ID NO.13、 14、 15中任意一项所 示。说　明　书 1/9 页 3 CN 114807403 A 3