(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210583374.5 (22)申请日 2022.05.25 (71)申请人 上海金域医学检验所有限公司 地址 200120 上海市浦东 新区康新公路 3377号6号楼 申请人 海南金域医学检验中心有限公司 (72)发明人 黄晓强　陈天睿　陈天垠　徐玉兵　 陈平　王祥敏　肖玲　杨博　 沈建如　马骥　黄健　严佳杰　 (74)专利代理 机构 广州广典知识产权代理事务 所(普通合伙) 44365 专利代理师 万志香 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01) C12Q 1/6806(2018.01)C12Q 1/6869(2018.01) C40B 50/06(2006.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种用于构建15基因编码区测序文库 的试 剂盒及其应用 (57)摘要 本发明涉及一种用于检测遗传性易栓症的 基因或其组合， 包括F2、 F5、 F9、 FGA、 FGG、 HABP2、 HRG、 LMAN1、 MTHFR、 PROC、 PROS1、 PROZ、 SERPINC1、 SERPIND1、 THBD中的任意至少一种。 通过对这些 基因或其组合的突变情况检测， 可有效进行遗传 性易栓症检测、 分类或预测、 治疗监测、 预后或其 它评价。 针对这15个基因的所有编码区域设计2 轮扩增引物， 其中第一轮扩增引物包括2组特异 性扩增的引物， 从而制备而成的测序文库 构建试 剂盒， 可实现对上述15个基因全部编码区域的同 步检测， 以达到对已知位点的灵敏检测和对未知 位点的深度挖掘， 进而满足科研和临床检测的需 求。 权利要求书3页 说明书25页 序列表65页 附图2页 CN 115198009 A 2022.10.18 CN 115198009 A 1.一种用于检测遗传性易栓症的基因或其组合， 其特征在于， 所述基因包括F2、 F5、 F9、 FGA、 FGG、 HABP2、 HRG、 LMAN1、 MTHFR、 PROC、 PROS1、 PROZ、 SERPINC1、 SERPIND1、 THBD中的任意 至少一种。 2.根据权利要求1所述用于检测遗传性易栓症的基因组合， 其特征在于， 所述基因包括 F2、 F5、 F9、 FGA、 FGG、 HABP2、 HRG、 LMAN1、 MTHFR、 PROC、 PROS1、 PROZ、 SERPINC1、 SERPIND1和 THBD。 3.权利要求1 ‑2任一项所述基因或其组合在制备检测、 分类或预测、 治疗监测、 预后或 其它评价遗传性 易栓症的试剂盒中的应用。 4.一种遗传性易栓症检测试剂盒， 其特征在于， 包括检测权利要求1 ‑2任一项所述基因 或其组合 突变情况的试剂。 5.根据权利要求4所述遗传性易栓症检测试剂 盒， 其特征是在于， 所述试剂 盒是采用聚 合酶链式反应技术、 原 位杂交技术、 酶学突变检测技术、 化学剪切错配技术、 质谱分析技术、 基因芯片技 术或基因测序技 术或它们的组合制备而成。 6.根据权利要求4所述遗传性易栓症检测试剂 盒， 其特征在于， 包括用于扩增遗传性易 栓症基因的引物， 所述引物包括第一轮特异性引物和第二轮通用引物； 所述第二轮通用引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO.417‑SEQ ID NO.418所示； 所述第一轮特异性引物包括如下至少1个 基因的A组和/或B组扩增引物： 针对F2基因的核苷酸序列如SEQ  ID NO.1‑SEQ ID NO.16所示的A组扩增引物和/或核 苷酸序列如SEQ  ID NO.211‑SEQ ID NO.224所示的B组扩增引物， 针对F5基 因的核苷酸序列如SEQ  ID NO.17‑SEQ ID NO.60所示的A组扩增引物和/或核 苷酸序列如SEQ  ID NO.225‑SEQ ID NO.270所示的B组扩增引物， 针对F9基 因的核苷酸序列如SEQ  ID NO.61‑SEQ ID NO.70所示的A组扩增引物和/或核 苷酸序列如SEQ  ID NO.271‑SEQ ID NO.280所示的B组扩增引物， 针对FGA基因的核苷酸序列如SEQ  ID NO.71‑SEQ ID NO.86所示的A组扩增引物和/或 核苷酸序列如SEQ  ID NO.281‑SEQ ID NO.294所示的B组扩增引物， 针对FGG基因的核苷酸序列如SEQ  ID NO.87‑SEQ ID NO.96所示的A组扩增引物和/或 核苷酸序列如SEQ  ID NO.295‑SEQ ID NO.306所示的B组扩增引物， 针对HABP2基 因的核苷酸序列如SEQ  ID NO.97‑SEQ ID NO.110所示的A组扩增引物和/ 或核苷酸序列如SEQ  ID NO.307‑SEQ ID NO.318所示的B组扩增引物， 针对HRG基因的核苷酸序列如SEQ  ID NO.111‑SEQ ID NO.120所示的A组扩增引物和/ 或核苷酸序列如SEQ  ID NO.319‑SEQ ID NO.330所示的B组扩增引物， 针对LMAN1基因的核苷酸序列如SEQ  ID NO.121‑SEQ ID NO.134所示的A组扩增引物 和/或核苷酸序列如SEQ  ID NO.331‑SEQ ID NO.342所示的B组扩增引物， 针对MTHFR基因的核苷酸序列如SEQ  ID NO.135‑SEQ ID NO.146所示的A组扩增引物 和/或核苷酸序列如SEQ  ID NO.343‑SEQ ID NO.356所示的B组扩增引物， 针对PROZ基 因的核苷酸序列如SEQ  ID NO.147‑SEQ ID NO.156所示的A组扩增引物和/ 或核苷酸序列如SEQ  ID NO.357‑SEQ ID NO.368所示的B组扩增引物， 针对PROC基 因的核苷酸序列如SEQ  ID NO.157‑SEQ ID NO.166所示的A组扩增引物和/ 或核苷酸序列如SEQ  ID NO.369‑SEQ ID NO.378所示的B组扩增引物，权　利　要　求　书 1/3 页 2 CN 115198009 A 2针对PROS1基因的核苷酸序列如SEQ  ID NO.167‑SEQ ID NO.184所示的A组扩增引物 和/或核苷酸序列如SEQ  ID NO.379‑SEQ ID NO.394所示的B组扩增引物， 针对SERPINC1基因的核苷酸序列如SEQ  ID NO.185‑SEQ ID NO.194所示的A组扩增引 物和/或核苷酸序列如SEQ  ID NO.395‑SEQ ID NO.402所示的B组扩增引物， 针对SERPIND1基因的核苷酸序列如SEQ  ID NO.195‑SEQ ID NO.202所示的A组扩增引 物和/或核苷酸序列如SEQ  ID NO.403‑SEQ ID NO.410所示的B组扩增引物， 针对THBD基 因的核苷酸序列如SEQ  ID NO.203‑SEQ ID NO.210所示的A组扩增引物和/ 或核苷酸序列如SEQ  ID NO.411‑SEQ ID NO.416所示的B组扩增引物。 7.根据权利要求5所述遗传性易栓症检测试剂 盒， 其特征在于， 所述第 一轮特异性引物 包括如下基因的A组和B组扩增引物： 针对F2基因的核苷酸序列如SEQ  ID NO.1‑SEQ ID NO.16所示的A组扩增引物和/或核 苷酸序列如SEQ  ID NO.211‑SEQ ID NO.224所示的B组扩增引物， 针对F5基 因的核苷酸序列如SEQ  ID NO.17‑SEQ ID NO.60所示的A组扩增引物和/或核 苷酸序列如SEQ  ID NO.225‑SEQ ID NO.270所示的B组扩增引物， 针对F9基 因的核苷酸序列如SEQ  ID NO.61‑SEQ ID NO.70所示的A组扩增引物和/或核 苷酸序列如SEQ  ID NO.271‑SEQ ID NO.280所示的B组扩增引物， 针对FGA基因的核苷酸序列如SEQ  ID NO.71‑SEQ ID NO.86所示的A组扩增引物和/或 核苷酸序列如SEQ  ID NO.281‑SEQ ID NO.294所示的B组扩增引物， 针对FGG基因的核苷酸序列如SEQ  ID NO.87‑SEQ ID NO.96所示的A组扩增引物和/或 核苷酸序列如SEQ  ID NO.295‑SEQ ID NO.306所示的B组扩增引物， 针对HABP2基 因的核苷酸序列如SEQ  ID NO.97‑SEQ ID NO.110所示的A组扩增引物和/ 或核苷酸序列如SEQ  ID NO.307‑SEQ ID NO.318所示的B组扩增引物， 针对HRG基因的核苷酸序列如SEQ  ID NO.111‑SEQ ID NO.120所示的A组扩增引物和/ 或核苷酸序列如SEQ  ID NO.319‑SEQ ID NO.330所示的B组扩增引物， 针对LMAN1基因的核苷酸序列如SEQ  ID NO.121‑SEQ ID NO.134所示的A组扩增引物 和/或核苷酸序列如SEQ  ID NO.331‑SEQ ID NO.342所示的B组扩增引物， 针对MTHFR基因的核苷酸序列如SEQ  ID NO.135‑SEQ ID NO.146所示的A组扩增引物 和/或核苷酸序列如SEQ  ID NO.343‑SEQ ID NO.356