(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202210712584.X (22)申请日 2022.06.22 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 114774563 A (43)申请公布日 2022.07.22 (73)专利权人 北京市动物疫病预防控制中心 地址 100029 北京市大兴区生物医药基地 祥瑞大街19号 专利权人 北京纳百生物科技有限公司 (72)发明人 程汝佳　沈光年　朱良全　王培　 巩玉洁　李巧玲　赵荣茂　雷琪莉　 李佳　殷雨晴　陈敏姮　 乌那尔汗·吉斯汗　 努尔麦麦提·阿穆提　 居马别克·夏拉巴依 　 沙娜瓦尔·塔希　 (74)专利代理 机构 北京市万慧达律师事务所 11111 专利代理师 谢敏楠 (51)Int.Cl. C12Q 1/689(2018.01) C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01)(56)对比文件 RU 2621864 C1,2017.0 6.07 CN 111876502 A,2020.1 1.03 CN 105624303 A,2016.0 6.01 CN 108220461 A,2018.0 6.29 WO 2016193896 A1,2016.12.08 RU 2715333 C1,2020.02.26 US 2006019255 A1,2006.01.26 CN 103409520 A,2013.1 1.27 Lotfi Bouna adja 等.Real-time PCR for identificati on of Brucel la spp.: A comparative study of IS71 1, bcsp31 and per target genes. 《Veteri nary Microbiology》 .2009,第137 卷(第1-2期),第 156-164页. Michel S Zygmunt 等.DNA po lymorphis m analysis of Brucel la lipopolysaccharide genes reveals marked dif ferences i n O- polysaccharide bi osynthetic genes betwe en smooth and rough Brucel la species and novel species-specific markers. 《BM C Microbiology》 .2009,第9卷第1-13页. 审查员 王冬煌 (54)发明名称 一种犬种布鲁氏菌病的检测试剂及应用 (57)摘要 本发明属于生物 技术领域， 公开了一种犬种 布鲁氏菌病的检测试剂及应用。 与其他布鲁氏菌 核酸检测方法相比， 本发明建立的方法是通过荧 光信息直接实现对犬种布鲁氏菌病进行快速鉴 定， 具有便捷、 准确、 灵敏、 特异等优点， 大大缩短 了检测时间， 对于犬种布鲁氏菌病的临床诊断具 有重大的应用价值， 公共卫生安全意义十分显 著。 权利要求书2页 说明书10页 序列表4页 附图4页 CN 114774563 B 2022.10.28 CN 114774563 B 1.一种犬种布鲁氏菌病的检测试剂， 其特 征在于， 所述检测试剂含有成套试剂1， 或 成套试剂2； 所述成套试剂1包括： 如SEQ ID NO： 1和2所示的引物对以及 如SEQ ID NO： 3所示的探针； 和 如SEQ ID NO： 7和8所示的引物对以及 如SEQ ID NO： 9所示的探针； 所述成套试剂2包括： 如SEQ ID NO： 1和2所示的引物对以及 如SEQ ID NO： 3所示的探针； 和 如SEQ ID NO： 4和5所示的引物对以及 如SEQ ID NO： 6所示的探针。 2.如权利要求1所述的检测试剂， 其特征在于， 所述成套试剂1的2条探针的5 ’端分别标 记有不同的荧 光报告基团； 所述成套试剂2的2条探针的5 ’端分别标记有不同的荧 光报告基团。 3.一种BCSP31基因和SEQ  ID NO:11所示序列的检测试剂， 其特征在于， 所述检测试剂 含有成套试剂1或 成套试剂2； 所述成套试剂1包括： 如SEQ ID NO： 1和2所示的引物对以及 如SEQ ID NO： 3所示的探针； 和 如SEQ ID NO： 7和8所示的引物对以及 如SEQ ID NO： 9所示的探针； 所述成套试剂2包括： 如SEQ ID NO： 1和2所示的引物对以及 如SEQ ID NO： 3所示的探针； 和 如SEQ ID NO： 4和5所示的引物对以及 如SEQ ID NO： 6所示的探针。 4.如权利要求3所述的检测试剂在制备检测犬种布鲁氏菌病的试剂盒中的应用。 5.一种鉴定待测样品是否含有或疑似含犬种布鲁氏菌的方法， 其特征在于， 包括以下 步骤： 以待测样品的核酸为模板， 以权利要求1至3任一所述的检测试剂进行双重实时荧光定 量PCR， 然后进行如下评判： 如果检出两种荧光信号， 则待测样品中含有或疑似含有非犬种 布鲁氏菌的布鲁氏菌； 如果检出一种荧光信号， 则待测样品中含有或疑似含有犬种布鲁氏 菌； 如果未检出荧光信号， 则待测样品中不含有或疑似不含有布鲁氏菌， 所述方法用于非疾 病的诊断与治疗。 6.一种鉴定待测样品是否含有或疑似含犬种布鲁氏菌的方法， 其特征在于， 包括以下 步骤： 以待测样品的核酸为模板， 以权利要求1至3任一所述的检测试剂进行双重实时荧光定 量PCR， 然后进行如下评判： 如果获得2条S形扩增曲线， 则待测样品中含有或疑似含有非犬 种布鲁氏菌的布鲁氏菌； 如果获得1条S形扩增曲线， 则待测样品中含有或疑似含有犬种布 鲁氏菌； 如果不能获得S形扩增曲线， 则待测样品中不含有或疑似不含有布鲁氏菌， 所述方 法用于非疾病的诊断与治疗。 7.一种犬种布鲁氏菌的检测系统， 其特 征在于， 所述检测系统包括以下构件： 1） BCSP31基因和SEQ  ID NO:11所示序列的检测构件； 2） 数据处 理构件； 3） 结果输出构件； 所述BCSP31基因和SEQ  ID NO:11所示序列的检测构件含有权利要求1 ‑3任一所述的检权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114774563 B 2测试剂。 8.如权利要求7所述的检测系统， 其特征在于， 所述检测构件包含检测仪器， 所述检测 仪器选自荧 光定量PCR仪、 测序仪中的一种或多种。 9.如权利要求7所述的检测系统， 所述检测构件的检测结果为荧光信号或 “S”形扩增曲 线。 10.如权利要求7 所述的检测系统， 其特 征在于， 所述数据处 理构件被 配置为： 根据检测构件检测的待测样品中BCSP31基因和SEQ  ID NO:11所示序列检出与否的结 果， 判断待测样品中是否含有布鲁氏菌和/或布鲁氏菌的类型； 所述数据处 理构件的判断标准 为： 若待测样品中同时检出BCSP31基因和SEQ  ID NO:11所示序列， 则 待测样品中含有或疑 似含有非犬种布鲁氏菌的布鲁氏菌； 若待测样品中检出BCSP31基因且未检出SEQ  ID NO:11所示序列， 则 待测样品中含有或 疑似含有犬种布鲁氏菌； 若待测样品中无法检出BCSP31基因和SEQ  ID NO:11所示序列， 则 待测样品中不含有或 疑似不含有布鲁氏菌 。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114774563 B 3