(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210582933.0 (22)申请日 2022.05.26 (71)申请人 甘肃润牧生物工程有限责任公司 地址 737100 甘肃省金昌市永昌县 朱王堡 镇永清路北侧(永清路8- 6) (72)发明人 乐祥鹏　孔园园　张兆才　李建栋　 李宝胜　叶炜　董彦琴　赵锦龙　 赵海庆　 (74)专利代理 机构 西安通大专利代理有限责任 公司 6120 0 专利代理师 范巍 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种湖羊SLC27A6基因SNP的检测方法及其 在肉质性状早期筛 选中的应用 (57)摘要 本发明公开了一种湖羊SLC27A6基因SNP的 检测方法及其在肉质性状早期筛选中的应用。 本 发明通过湖羊组织DNA的提取、 iMLDR技术进行分 型、 等位基因频率与基因型频率计算， 以及将湖 羊背最长肌脂肪 酸百分比与 SLC27A6基因突变位 点g.504G>C进行关联分析， 揭示了 该位点的多态 性及所存在的与脂肪酸表型显著相关的分子标 记， 为通过标记辅助选择选育优异肉品质的绵羊 新品系提供依据。 权利要求书1页 说明书6页 序列表1页 附图1页 CN 114717338 A 2022.07.08 CN 114717338 A 1.一种检测湖羊SLC27A6基因单核苷酸多态性的方法， 其特 征在于： 包括以下步骤： 以提取的湖羊基因组DNA为模板进行PCR扩增， 对扩增产物包含的单核苷酸多态性位点 进行基因分型， 所述单核苷酸多态性 位点为位于SLC27A6基因上的突变位 点g.504G＞C。 2.根据权利要求1所述一种检测湖羊SLC27A6基因单核苷酸多态性的方法， 其特征在 于： 所述PCR扩增的引物为： 上游引物： 5 ’ ‑ATTGAGTTGTAAGACAGGGCACA‑3’ 下游引物： 5 ’ ‑TACGCTGCT TAGGAGGAATGAG‑3’。 3.根据权利要求1或2所述一种检测湖羊SLC27A6基因单核苷酸多态性的方法， 其特征 在于： 所述PCR扩增的反应体系包括30ng/ μL模板1μL以及10pmol/ μL的上、 下游引物各0.5 μ L； PCR扩增的反应程序为： 95℃预变性4min； 94℃变性30s， 63.8℃退火60s， 72℃延伸90s， 共 34个循环； 72℃再延伸9mi n。 4.根据权利要求1所述一种检测湖羊SLC27A6基因单核苷酸多态性的方法， 其特征在 于： 所述基因分型采用iMLDR技 术。 5.根据权利要求1所述一种检测湖羊SLC27A6基因单核苷酸多态性的方法， 其特征在 于： 所述基因 组DNA采用酚 ‑氯仿法提取。 6.根据权利要求1所述一种检测湖羊SLC27A6基因单核苷酸多态性的方法， 其特征在 于： 所述突变位点是通过DNA混池测序确定的。 7.一种检测湖羊SLC27A6基因单核苷酸多态性的试剂盒， 其特征在于： 该试剂盒包括用 于扩增SLC27A6基因单核苷酸多态 性位点的引物， 所述单核苷酸多态 性位点为位于SLC27A6 基因上的突变位 点g.504G＞C。 8.如权利要求1所述的检测湖羊SLC27A6基因单核苷酸多态性的方法在绵羊标记辅助 选择育种中的应用。 9.绵羊SLC27A6基因突变位点g.504G＞C或该突变位点检测试剂在绵羊标记辅助选择 育种中的应用。 10.根据权利要求8 或9所述的应用， 其特征在于： 具有GG基因型的个体在肉质性状上较 优。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114717338 A 2一种湖羊SL C27A6基因SNP的检测方 法及其在肉质性状 早期筛 选中的应用 技术领域 [0001]本发明属于分子遗传学检测及育种领域， 具体涉及利用DNA混池测序检测出的湖 羊SLC27A6基因单核苷酸多态性(Single  nucleotide  polymorphism,SNP)位点， 并结合荧 光多重酶连接反应(Improved  multiplex  ligation detection  reaction,iMLDR)技术对 该位点进行基因分型及利用分型 结果与脂肪酸百分比进行关联性分析。 背景技术 [0002]SNP广泛存在于基因组中， 大约每300bp的序列长度就会出现一个SNP。 SNP根据突 变发生位置可分为编码区SNP和非编码区SNP， 前者主要通过影响蛋白质的结构， 进而对表 型产生影响。 目前筛选重要性状相关 的SNP在遗传改良等方面具有重要作用。 iMLDR技术是 一种新型高通量SNP基因分型技术， 该技术具有分型准确率高、 成本低、 速度快、 可同时检测 多个SNP位 点等优势。 [0003]脂肪酸是影响肉品质重要的属性之一， 其含量和组成决定了脂肪的质地特性以及 肌肉的氧化稳定性， 影响肉的风味、 嫩度、 保质期等， 同时脂肪酸是机体的主要能量来源。 脂 肪酸按照碳链饱和程度分为饱和脂肪酸(Saturated  fatty acid,SFA)、 单不饱和脂肪酸 (Monounsaturated  fatty acids,MUFA)、 多不饱和脂肪酸(Polyunsaturated  fatty  acids,PUFA)。 SFA可致使羊肉产生膻味， 并能增加人体患心血管疾病的风险， SFA中的己酸 (C6:0)、 辛酸(C8:0)、 癸酸(C10:0)是导致羊肉产生膻味的主要脂肪酸， 其中C10:0占主导作 用； MUFA与肉香 味和整体可接受程度呈正相关关系， MUFA还具有降低血糖、 血脂、 胆固醇水 平等功能， 油酸(C18:1n9c)是机体内含量最高的一种MUFA， 可降低低密度脂蛋白(Low   density lipoprotein,LDL)和胆固醇水平； P UFA中的n ‑6PUFA和n‑3PUFA是人体的必须脂肪 酸， 与人体健康 紧密相关， 且人体自身合成， 只能从食物中获取， PUFA对炎症、 高血压、 缺血 性中风、 外周动脉疾病和动脉粥样硬化具有 有利影响。 [0004]脂肪酸转运蛋白6(Solute  carrier family 27 member 6,SLC27A6)是一种膜相 关的脂肪酸结合蛋白， 促进长链脂肪酸的吸收， 同时还参与脂肪酸的跨膜转运和脂质代谢。 Massimo等人研究发现， SLC27A6作为牛乳腺组织中的一种跨膜蛋白， 可将游离脂肪酸(C16: 0、 C18:1n9c、 C20:4n6、 C24:0)从血液转运到牛乳腺细胞。 沈子亮等对奶牛乳腺上皮细胞中 的SLC27A6干扰后， SLC27A6的mRNA和蛋白质表达量均减少， 同时脂肪酸转运及脂肪氧化相 关基因(ACSL4、 CD36、 CPT1A)的mRNA表达量也减少， PPARG、 FABP3、 FADS2基因的mRNA表达量 升高， 此外， 乳腺上皮细胞中C16:0、 C18:0的含量降低， C18:1n9c、 C20:4n6的含量升高。 Nafikov等人研究发现， SLC27A6基因中的SNPs(g.70916T/C、 g.67847T/C、 g.16048G/C、 g.15975T/C、 g.15740A/C、 g.390C/T、 g.242A /T)与牛奶中的SFA、 UFA、 MUFA及SFA: UFA的值显 著相关， 同时SLC27A6基因中的单倍型H3(G1C2G3T4C5C6T7)与较低的SFA及较 高的UFA显著 相关。 [0005]尽管SLC27A6在 脂肪酸运输及脂质代 谢中发挥重要作用， 但目前尚无绵羊SLC27A6说　明　书 1/6 页 3 CN 114717338 A 3