(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 20221072826 5.8 (22)申请日 2022.06.24 (71)申请人 长岛海洋生态文明综合试验区海 洋 经济促进中心 地址 265899 山东省烟台市长岛综合试验 区海港街12号 申请人 山东省海洋科学研究院 （青岛国家 海洋科学研究中心） (72)发明人 袁廷柱　宋祖德　王学现　刘凯　 李辰　 (74)专利代理 机构 北京识然知识产权代理事务 所(普通合伙) 11975 专利代理师 曾庆国 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01)C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种海带的选 育方法 (57)摘要 本发明提供一种海带的选育方法， 通过耐热 品系和非耐热品系海带进行多态 性筛选， 确定了 与海带耐热性相连锁的SSR标记， 并建立了检测 具有耐热性状海 带亲本的方法， 从而为海带的遗 传育种提供有效的分子标记。 本发 明通过对耐热 的海带品系和温度敏感型海带品系的扩增产物 进行分析， 获得了与海带耐热性状相连锁的SSR 标记， 使用该SSR标记可以筛选与耐热性相关的 海带品系， 可用于杂交品系的筛 选鉴定。 权利要求书1页 说明书4页 序列表1页 附图2页 CN 115058537 A 2022.09.16 CN 115058537 A 1.一种与海带耐热性状相连锁的SSR标记， 其特征在于， 所述的SSR标记的核苷酸序列 如下： gtaggcaaaaccatcaacacaacgatttataaaacgacaggacaacaggaaacggccgataaag(ac)naacg ggcgggcgggctggaggcggacgtactcgggaaggtatcacatgtttaggtgtgtaacactaacactctaacgtgt tat； 其中n 为不小于6的自然数。 2.一种用于检测权利要求1所述的SSR标记 的引物对， 其特征在于， 所述的引物对用于 扩增包含有(ac)n核心重复的片段。 3.如权利要求2所述的引物对， 其特征在于， 所述的引物对， 其上游引物的序列为SEQ   ID NO:1， 下游引物序列为SEQ  ID NO:2。 4.如权利要求3所述的引物对， 其特征在于， 所述的引物对的上游引物和/或下游引物 进行了5′端荧光素标记。 5.权利要求1所述的S SR标记在筛 选耐热性海带 亲本中的应用。 6.一种筛选耐热性海带亲本的方法， 其特征在于， 所述的方法是通过检测待筛选个体 中权利要求1所述的S SR标记的基因型来进行筛 选。 7.如权利要求6所述的方法， 其特征在于， 所述的方法， 是使用权利要求3或4所述的引 物对对基因组DNA样品进行扩增后， 对 扩增产物的基因型进行分析来进行筛 选。 8.如权利要求7 所述的方法， 其特 征在于， 所述的基因型中包 含有177bp的片段。 9.如权利要求7 所述的方法， 其特 征在于， 所述的基因型为16 5/177。 10.如权利要求7所述的方法， 其特征在于， 所述的方法， 是采用Genemapper4.0软件生 成位点的图谱文件， 测出PCR扩增产物长度与荧光强度峰值， 获得每个位点的基因型； 根据 基因型确定是否为耐热的海带品系。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115058537 A 2一种海带的选育方 法 技术领域 [0001]本发明属于海藻遗传育种技 术领域， 具体涉及一种海带的选 育方法。 背景技术 [0002]海带(Laminaria  japonica)， 是一种多年生大型食用藻类。 其孢子体为大型、 褐 色、 扁平带状， 结构上分为叶片、 柄部和固着器。 其中固着器呈假根状， 叶片为表皮、 皮层和 髓部组织所 组成， 叶片下部有孢子囊， 具有黏液腔， 可分泌滑性物质。 固着 器树状分支， 用以 附着海底岩石， 生长 于水温较低的海中。 [0003]海带是经济海藻养殖的主要对象， 我国亦是海带养殖大国， 截至2016年养殖面积 约为4.3万hm2， 养殖产量为141万吨以上， 海带年产量占中国藻类养殖总产量的百分之六十 以上。 [0004]但海带属于低温养殖藻种， 我国北方采收期集中在每年的5至7月份， 水温超过20 ℃时海带就会停止生长并逐渐腐烂 。 而耐高温海带品系有效延长 了孢子体的生长周期。 [0005]目前国内已经开展了耐热海带的研究工作， 例如中国海洋大学和中国水产科学研 究院黄海水产研究所都分别进行了海带抗热品系的研究。 并且一些品系(海带901)已进行 了实际养殖。 [0006]然而， 传统的选择育种是基于表型性状的数值进行选育， 存在着育种周期长 的缺 陷。 而随着现代分子生物学技术的发展， 分子标记辅助育种 可以克服常规育种 过程中所采 用的形态学 标记受环境影响较大、 不 易直接选择等缺点， 从而可加速 育种进程。 [0007]简单序列重复标记(Simple  sequence  repeat,SSR)， 也称为微卫星标记， 具有共 显性、 多等位,变异高等优点,在基因组中分布广泛,常被应用于群体遗传分析、 遗传连锁图 谱构建、 QTL作图等研 究。 有关海带的SSR相关的研 究工作已有开展， 但目前尚未见运用SSR 标记对海带耐热性状进行关联分析的相关研究。 发明内容 [0008]本发明提供一种耐热性海带的选育方法， 通过耐热品系和非耐热品系海带进行多 态性筛选， 确定了与海带耐热性相连锁的SSR标记， 并建立了检测具有耐热性状海 带亲本的 方法， 从而为海带的遗传育种提供有效的分子标记。 [0009]本发明首先提供一种与海带耐热性状相连锁的SSR标记LJ ‑SSRm07， 其核苷酸序列 如下： [0010]gtaggcaaaaccatcaacacaacgatttataaaacgacaggacaacaggaaacggccgataaag(ac) naacgggcgggcgggctggaggcggacgtactcgggaaggtatcacatgtttaggtgtgtaacactaacactctaa cgtgttat； 其中n 为不小于6的自然数； [0011]本发明还提供用于检测上述SSR标记的引物对， 其中一种引物对， 其上游引物序列 如为5′ ‑gtaggcaaaaccatcaacacaacg‑3′(SEQ ID NO:1)， [0012]下游引物序列为5 ′ ‑ataacacgttagagtgttagtg‑3′(SEQ ID NO:2)；说　明　书 1/4 页 3 CN 115058537 A 3