(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210829464.8 (22)申请日 2022.07.14 (71)申请人 云南省农业科 学院生物技 术与种质 资源研究所 地址 650223 云南省昆明市盘龙区北京路 2238号 (72)发明人 陈丹　蔡青　武晓阳　周国雁　 伍少云　杜娟　 (74)专利代理 机构 北京腾远知识产权代理事务 所(普通合伙) 11608 专利代理师 王清娟 (51)Int.Cl. C12N 15/10(2006.01) C12Q 1/6806(2018.01) C12Q 1/6895(2018.01)C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种植物DNA提取中叶片干燥前处 理的方法 (57)摘要 本发明属于分子生物 技术领域， 具体公开一 种植物DNA提取中叶片干燥前处理的方法， 包括 以下步骤： S1： 于田间取新鲜植物样品； S2:将样 品置于烘箱中， 设置温度为45℃， 烘干处理6h； S3： 对烘干后的样品进行总DNA提取， 本发明通过 比较不同叶片处理方式对DNA提取浓度的影响， 筛选出最佳干燥处理方式为烘箱45℃6小时， 叶 片量0.06g。 用此方法处理叶片， DNA提取平均浓 度较高， 为3761.23ng/μL， 可以完全满足SSR分 析要求。 权利要求书1页 说明书8页 附图2页 CN 115044582 A 2022.09.13 CN 115044582 A 1.一种植物DNA提取中叶片干燥前处 理的方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： S1： 于田间取新鲜植物样品； S2:将样品置于烘箱中， 设置温度为 45℃， 烘干处 理6h； S3： 对烘干后的样品进行总DNA提取。 2.根据权利要求1所述的一种植物DNA提取中叶片干燥前处理的方法， 其特征在于， 步 骤S1中， 所述样品为田间正常生长处于分蘖期的小麦叶片。 3.根据权利要求1所述的一种植物DNA提取中叶片干燥前处理的方法， 其特征在于， 步 骤S3中， 对烘干后的样品进行总DNA提取的方法为CTAB法。 4.根据权利要求1所述的一种植物DNA提取中叶片干燥前处理的方法， 其特征在于， 步 骤S3中， 对样品进行总DNA提取时， 样品的用量 为0.06g。 5.据权利要求1所述的一种植物DNA提取中叶片干燥前处理的方法， 其特征在于， 步骤 S2中， 所述烘 箱为电热鼓风干燥箱。 6.根据权利要求1 ‑5任一所述的一种植物DNA提取中叶片干燥前处理的方法， 其特征在 于， 对烘干后的样品进行总DNA提取的方法包括以下步骤： (1)取烘干后的样品剪碎加钢珠置于细胞组织破碎仪中进行研磨， 设置研磨参数： 研磨 次数2次， 每次26℃， 380 0rpm， 50s， 两次间隔时间20s； (2)研磨后的样品加入DNA提取 液， 进行总DNA提取。 7.根据权利要求5所述的一种植物DNA提取中叶片干燥前处理的方法， 其特征在于， 步 骤(2)中总DNA的提取 方法具体为： (1)加入预 热的DNA提取 液CTAB 800 μL， 65℃水浴3 0min‑1小时； (2)加入80 0 μL氯仿， 摇匀3 0分钟； (3)离心， 85 00rpm， 10分钟； (4)吸出上清液倒入1.5mL 新离心管内， 再加入80 0 μL氯仿， 摇匀3 0分钟； (5)离心85 00rpm， 10分钟； (6)吸出上清液倒入1.5mL 新离心管内， 加入0.6倍体积异丙醇； (7)混匀后， 4℃放置 30分钟～2小时； (8)离心， 120 00rpm， 10分钟； 留沉淀； (9)加入70％乙醇于 离心机内10 000rpm洗2次， 每次3分钟； (10)采用5 0uL ddH2O溶解， 4℃放置， 过夜； (11)采用Nan o Drop 2000仪器测定DNA浓度， 取1 μL  DNA原液用于测定， 并记录数据。 8.权利要求7所述的一种植物DNA提取中叶片干燥前处理的方法在分子标记辅助育种 中的应用。 9.权利要求1‑5任一所述的一种植物DNA提取中叶片干燥前处理的方法在小麦DNA提取 中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115044582 A 2一种植物DNA 提取中叶片干 燥前处理的方 法 技术领域 [0001]本发明属于分子生物技术领域， 具体涉及一种植物DNA提取中叶片干燥前处理的 方法。 背景技术 [0002]植物DNA提取一般采用低温保存组织， 低温条件下破碎提取的方式， 以防止DNA降 解。 常规操作是存储在低温冰箱， 然后从低温冰箱取出到 室温环境， 而后再加入 液氮研磨提 取DNA， 在该过程中， 存在植物组织融化又冷冻， 反复冻融的问题， 从而加大DNA降解率。 因 此， 在田间取材后， 先将植物组织样品干燥处理， 可使植物组织样品在常温下进行保藏， 从 而避免上述问题， 目前关于DNA提取中， 叶片等组织干燥前处理的方法有干燥剂、 真空冷冻 干燥机、 烘箱、 微波炉等， 不同的干燥方式和干燥条件处理对植物组织的DNA 提取影响较大， 而针对小麦叶片DNA提取至今没有详细的前处理方法， 以达到更方便、 快捷、 高效提取小麦 组织DNA。 发明内容 [0003]本发明为研究不同干燥 处理因素对叶片D NA提取效果的影响， 以达到优化创建DNA 提取前处理方法， 筛 选最佳方式， 提供一种植物DNA提取中叶片干燥前处 理的方法。 [0004]为实现以上目的， 本发明提供以下技 术方案： [0005]一种植物DNA提取中叶片干燥前处 理的方法， 包括以下步骤： [0006]S1:于田间取新鲜植物样品； [0007]S2:将样品置于烘箱中， 设置温度为 45℃， 烘干处 理6h； [0008]S3:对烘干后的样品进行总DNA提取。 [0009]进一步的， 步骤S1中， 所述样品为田间正常生长处于分蘖期的小麦叶片。 [0010]进一步的， 步骤S3中， 对烘干后的样品进行总DNA提取的方法为CTAB法。 [0011]进一步的， 步骤S3中， 对样品进行总DNA提取时， 样品的用量 为0.06g。 [0012]进一步的， 步骤S2中， 所述烘 箱为电热鼓风干燥箱。 [0013]本发明通过比较不同叶片处理方式对DNA提取浓度的影响， 筛选出最佳干燥处理 方式为烘箱45℃6小时， 叶片量0.06g。 用此方法处理叶片， DNA提取平均浓度和其他处理方 式对比具有显著的差异， 使用该条件进行处理后DNA提取平均浓度为3761.23ng/ μL， 最高浓 度达到4237.4ng/ μL， 可以完全满足上百次的SSR分析要求， 且扩增条带均清晰可见， 表现稳 定。 附图说明 [0014]图1： 不同干燥条件下处理后叶片状态显示图； (注： 图1A 未经干燥 处理低温保存叶 片(4℃)； B真空冷冻干燥24小时叶片； C真空冷冻 干燥48小时叶片； D烘箱35℃6小时叶片； E 烘箱45℃6小时叶片； F烘 箱55℃6小时叶片； G烘 箱65℃6小时叶片)说　明　书 1/8 页 3 CN 115044582 A 3