(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210758961.3 (22)申请日 2022.06.30 (71)申请人 海南大学 地址 570228 海南省海口市人民大道58号 海南大学 (72)发明人 吴小易　陈廷　周智愚　张金枫　 任春华　陈小丽　孙彩云　刁德华　 胡超群　 (74)专利代理 机构 北京集佳知识产权代理有限 公司 11227 专利代理师 王欢 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种棕点石斑鱼微 卫星标记及其引物 (57)摘要 本发明公开了一种棕点石斑鱼微卫星标记 及其引物。 本发明利用 棕点石斑鱼基因组数据， 多重筛选和验证， 获得8个SSR标记， 其核苷酸序 列分别如SEQ  ID NO.1～8所示。 本发明所述SSR 标记， 该标记具有多态性好、 杂合度高的特点； 其 检测引物具有扩增稳定、 重复性好的特点。 本发 明的SSR标记引物与方法可用于棕点石斑鱼人工 养殖群体、 增殖放流群体、 野生群体的种群遗传 多样性分析， 在棕点石斑鱼人工养殖和增殖放流 方面具有应用前 景。 权利要求书2页 说明书7页 序列表5页 CN 114891900 A 2022.08.12 CN 114891900 A 1.一种棕点石斑鱼的SSR分子标记， 其特征在于， 包括如下分子标记中的至少一种： EFDSSR‑01、 EFDSSR ‑02、 EFDSSR ‑03、 EFDSSR ‑04、 EFDSSR ‑05、 EFDSSR ‑06、 EFDSSR ‑07、 EFDSSR ‑ 08； 其中， 所述EFD SSR‑01～EFDSSR‑08的核苷酸序列依次如SEQ  ID NO.1～8所示。 2.权利要求1所述的S SR分子标记的扩增引物。 3.根据权利要求2所述的扩增引物， 其特 征在于， 包括： 扩增EFDSSR‑01的引物对， 其包括核苷酸序列如SEQ  ID NO.9～10所示的上、 下游引物； 扩增EFDSSR ‑02的引物对， 其包括核苷酸序列如SEQ  ID NO.11～12所示的上、 下游引 物； 扩增EFDSSR ‑03的引物对， 其包括核苷酸序列如SEQ  ID NO.13～14所示的上、 下游引 物； 扩增EFDSSR ‑04的引物对， 其包括核苷酸序列如SEQ  ID NO.15～16所示的上、 下游引 物； 扩增EFDSSR ‑05的引物对， 其包括核苷酸序列如SEQ  ID NO.17～18所示的上、 下游引 物； 扩增EFDSSR ‑06的引物对， 其包括核苷酸序列如SEQ  ID NO.19～20所示的上、 下游引 物； 扩增EFDSSR ‑07的引物对， 其包括核苷酸序列如SEQ  ID NO.21～22所示的上、 下游引 物； 扩增EFDSSR ‑08的引物对， 其包括核苷酸序列如SEQ  ID NO.23～24所示的上、 下游引 物。 4.根据权利要求3所述的扩增引物， 其特征在于， 所述的扩增引物的上游引物的5'端标 记有荧光基团； 所述的荧 光基团为ROX、 FAM、 H EX或TAMRA。 5.一种用于棕点石斑鱼群体遗传多样性分析及种群鉴定的试剂盒， 其特征在于， 包含 权利要求2 ～4任一项所述的扩增引物以及可接受的其 他试剂盒组分。 6.权利要求1所述的SSR标记、 权利要求2～4任一项所述的扩增引物或权利要求5所述 的试剂盒在棕点石斑鱼群 体遗传多样性分析及种群鉴定中的应用。 7.一种高效评估棕点石斑鱼种群遗传多样性的方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： 1)收集棕点石斑鱼群 体样本， 提取棕点石斑鱼个 体DNA； 2)以步骤1)提取的基因组DNA为模板， 利用权利要求2～4任一项所述的扩增引物进行 PCR扩增； 3)对步骤2)扩增的PCR产物进行分型； 4)对步骤3)获得的分型 结果进行遗传多样性分析。 8.根据权利要求7 所述的方法， 其特 征在于， 步骤2)中， 所述的PCR扩增的反应体系 为25 μL， 包括： 不含Mg2+的10×PCRbuffer2.5L、 25mM  MgCl2  2.0L、 10mM  dNTP0.5L、 高保真PCR酶1U、 10M正向引物0.5L、 10M反向引物0.5L、 DNA模板 12.5ng， 无菌双蒸水补足至25L； 所述PCR扩增的程序为： 95℃预变性5分钟；权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114891900 A 295℃变性3 0秒， 60℃退火3 0秒， 72℃延伸3 0秒， 共35个循环； 72℃再延伸6分钟。 9.根据权利要求7所述的方法， 其特征在于， 步骤(4)中， 利用GenAIex软件进行遗传多 样性分析， 所述遗传多样性分析的指标包括每个位点的等位基因数、 有效等位基因数、 香农 信息指数、 观测杂合度、 期望杂合度、 固定指数中的至少一种。 10.权利要求1所述的SSR标记、 权利要求2所述的扩增引物、 权利要求7所述的试剂盒或 权利要求8所述的评估方法在棕点石斑鱼养殖群体、 放流群体、 自然群体遗传多样性分析中 的应用。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114891900 A 3