(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211199057.X (22)申请日 2022.09.29 (71)申请人 天津市人民医院 地址 300000 天津市红桥区芥园道190号 (72)发明人 张春泽　贾杨　张锡朋　秦海　 刘兆策　马宏　李红洲　 (74)专利代理 机构 天津市宗欣专利商标代理有 限公司 1210 3 专利代理师 董光仁 (51)Int.Cl. C12Q 1/6834(2018.01) C12Q 1/6886(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种检测miR-92a的探针、 试剂盒及在制备 结直肠癌早期检测产品中的应用 (57)摘要 本发明公开了一种检测miR ‑92a的探针、 试 剂盒及在制备结直肠癌早期检测产品中的应用。 所述探针的核酸序列如SEQ  ID NO.1所示。 所述 试剂盒包括上述探针、 包被有特异性抗体的固相 载体、 酶标记的亲和素或链霉亲和素、 酶发光底 物。 本申请miR ‑92a的检测不依赖于PCR仪， 且不 受粪便中PCR酶抑制剂的影响； 通过检测粪便样 本中miR‑92a表达量， 可以区分正常人和结直肠 病人， 具有较高的灵敏度和特异度， 从而辅助诊 断早期结直肠癌。 权利要求书1页 说明书7页 附图2页 CN 115478099 A 2022.12.16 CN 115478099 A 1.一种检测miR ‑92a的探针， 其特 征在于： 所述探针的核酸序列如SEQ  ID NO.1所示。 2.一种检测miR ‑92a的探针， 其特征在于： 所述探针为SEQ  ID NO.1所示核酸序列经取 代、 缺失或添加一个或多个碱基获得的核酸序列， 且其与SEQ  ID NO.1所示的核酸序列功能 相同或相似。 3.一种检测miR ‑92a的探针， 其特征在于： 所述探针为与SEQ  ID NO.1所示核酸序列至 少有80％同一 性的核酸序列。 4.根据权利要求1 ‑3任一所述的检测miR ‑92a的探针， 其特征在于： 所述探针的两端分 别用地高辛和生物素 标记。 5.一种权利要求1 ‑4任一所述的检测miR ‑92a的探针在制备结直肠癌早期检测产品中 的应用。 6.一种检测miR ‑92a的试剂盒， 其特征在于： 所述试剂盒包括权利要求1 ‑4任一所述的 探针。 7.根据权利要求6所述的检测miR ‑92a的试剂盒， 其特征在于： 所述试剂盒还包括包被 有特异性 抗体的固相载体、 酶标记的亲和素或链霉亲和素、 酶发光底 物。 8.根据权利要求7所述的检测miR ‑92a的试剂盒， 其特征在于： 所述特异性抗体选用地 高辛抗体； 所述酶选用碱性磷酸酶或辣根氧化酶； 所述酶发光底物选用化学发光或荧光底 物； 所述固相载体选用磁珠或96孔 微孔板。 9.一种权利要求6 ‑8任一所述的检测miR ‑92a的试剂盒在作为结直肠癌早期检测产品 的应用。 10.根据权利要求9的应用， 其特征在于： 将粪便样本 中提取的RNA与探针在缓冲液中进 行杂交， 将获得的杂交产物转移到固相载体进行孵育杂交， 再将含有杂交产物的固相载体 依次与酶标记的亲和素和酶发光底 物孵育， 最后检测固相载体的荧 光信号。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115478099 A 2一种检测miR ‑92a的探针、 试剂盒及在制备结直肠癌早期检测 产品中的应用 技术领域 [0001]本发明涉及肿瘤分子诊断技术领域， 特别涉及一种检测miR ‑92a的探针、 试剂盒及 在制备结直肠癌早期检测产品中的应用。 背景技术 [0002]我国结直肠癌(colorectal  cancer,CRC)的发病率和死亡率逐年上升， 每1.5分钟 就有一人被确诊为CRC， 每5分钟就有1人死于CRC。 由于CRC发病的早期无特异症状， 一般确 诊时已发展到中晚期， 因此治疗效果差， 死亡率高。 如果在CRC发病的早期阶段可以及时诊 断并进行治疗， 则可提高其治愈率， 因此早期筛查是防治CRC的首要措施。 目前， 我国针对 CRC的筛查方法主要是CRC高危因素问卷调查和粪便隐血(FOB)检查， 其中一项阳性或者两 项均阳性者， 即被列入高危人群， 并建议进行结肠镜检查。 但粪便隐血检查的准确率极低， 同时由于结肠镜检查的流程复杂、 费用高、 痛苦大、 风险大等弊端， 导致目前针对CRC的筛查 依从性较差 。 因此， 一种高灵敏、 高特异、 依从性高的筛查 技术亟待被开发。 [0003]MicroRNA(miRNA)是一类内生的、 长度约为20 ‑24个核苷酸的小RNA， 其通过抑制 mRNA的翻译而在细胞内具有重要的调节作用。 Michael等人2003年首次发现一些miRNAs如 miR‑143和miR ‑145等在CRC组织中表达下降， 提示了miRNAs作为CRC标志物的潜在价值。 目 前， PCR是检测粪便mi RNA的最主要检测方法。 但PCR方法对样 本中核酸分子的完整性要求比 较高， 并且粪便中存在大量的PCR酶的抑制剂， 因此处理粪便样本的过程比较复杂， 而且提 取出来的核酸用PCR法扩增的效果不佳。 另外， PCR反应需要相关 的PCR仪来进行， 对相关检 测试剂以及配套耗材有着比较高的要求。 所以， 发明人认为， 提供一种抗干扰强、 不受粪便 中PCR抑制剂影响的检测粪便中miRNA的方法是非常有必要的。 发明内容 [0004]本发明为了解决上述技术问题， 提供了一种检测miR ‑92a的探针、 试剂盒及在制备 结直肠癌早期检测产品中的应用。 [0005]本发明是通过以下技 术方案得以实现的。 [0006]一 种 检 测 m i R ‑9 2 a 的 探 针 ，所 述 探 针 的 核 酸 序 列 为 5 ’‑ TTACAGGCCGGGACAAGTGCAATATT‑3’(SEQ ID NO.1)。 [0007]一种检测miR ‑92a的探针， 所述探针为SEQ  ID NO.1所示核酸序列经取代、 缺失或 添加一个或多个碱基获得的核酸序列， 且其与SEQ  ID NO.1所示的核酸序列功能相同或相 似。 [0008]一种检测miR ‑92a的探针， 所述探针为与SEQ  ID NO.1所示核酸序列至少有80％同 一性的核酸序列。 [0009]作为检测miR ‑92a的探针的优选方案， 所述探针的两端分别用地高辛和生物素标 记。 即所述探针的5 ’端用生物素标记， 3 ’端用地高辛标记； 或所述探针的5 ’端用地高辛标说　明　书 1/7 页 3 CN 115478099 A 3