(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210467007.9 (22)申请日 2022.07.19 (71)申请人 山东省林业科 学研究院 地址 250014 山东省济南市文化 东路42号 申请人 费县国有大青山林场 (72)发明人 陈俊强　毛秀红　李玉岭　张元帅　 董元夫　王翠艳　刘翠兰　孙音　 张谦　伏红英　王金娜　乔艳辉　 (74)专利代理 机构 济南尚本知识产权代理事务 所(普通合伙) 37307 专利代理师 倪迎春 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种快速鉴定七叶树种质资源的SSR分子标 记引物组及应用 (57)摘要 本发明公开了一种基于毛细管电泳技术快 速鉴定七叶树种质资源的SSR分子标记引物组及 应用， 所述引 物碱基序列如SEQIDNO.1 ‑16所示。 本发明实现了从分子水平快速鉴别七叶树种质 资源， 可以不受季节、 植物发育时期和生长环境 的影响。 还为七叶树种质资源遗传多样性评价、 亲缘关系分析、 分子标记辅助育种和新品种保护 等提供了参 考和支撑 。 权利要求书2页 说明书6页 附图1页 CN 114921580 A 2022.08.19 CN 114921580 A 1.一种基于毛细管电泳技术快速鉴定七叶树种质资源SS R分子标记引物 组， 其特征是： 碱基序列如下： 引物1： 上游引物5 ‘GTGGCCCATACCAGTAGAGC ’3(如： SEQ ID NO.1)， 下游引物5 ‘GCTTTTGGGTGCTGTTGAGG’3(如： SEQ ID NO.2)。 引物2： 上游引物5 ‘ATTCCGCACAACTCACCAGT’3(如： SEQ ID NO.3)， 下游引物5 ‘GCAGGAAACAGAGCACT TGC’3(如： SEQ ID NO.4)。 引物3： 上游引物5 ‘TCTGCTTTGACCTCGCCATT’3(如： SEQ ID NO.5)， 下游引物5 ‘GCTGTCTC CTTTGACGGTGA’3(如： SEQ ID NO.6)。 引物4： 上游引物5 ‘CGGTCCCATTCAACTCACGA ’3(如： SEQ ID NO.7)， 下游引物5 ‘TTTCACGATCTC CGGCGTAG’3(如： SEQ ID NO.8)。 引物5： 上游引物5 ‘GCAGCATCTC CAGCCTTAGT’3(如： SEQ ID NO.9)， 下游引物5 ‘AATTTGGTTGCAAGCGCCTT’3(如： SEQ ID NO.10)。 引物6： 上游引物5 ‘GTCTGTCCGTCCGCGATTAT’3(如： SEQ ID NO.11)， 下游引物5 ‘CGCAAACTTGTCGACG GATC’3(如： SEQ ID NO.12)。 引物7:上游引物5 ‘CCCTGGAGGCACAAACTGAT’3(如： SEQ ID NO.13)， 下游引物5 ‘AGTCCACATCTCACTGCTGC ’3(如： SEQ ID NO.14)。 引物8： 上游引物5 ‘CCAACTCGGCCATCTTGACT’3(如： SEQ ID NO.15)， 下游引物5 ‘GGAAGAAATGGCGCATGCT T’3(如： SEQ ID NO.16)。 2.权利要求1所述的七叶树SSR分子标记引物在鉴定七叶树种质资源、 遗传多样性评 价、 亲缘关系分析和分子标记辅助育种中的应用。 3.权利要求2所述的应用， 其特 征是： 包括以下的步骤： (1)七叶树基因 组DNA的提取； (2)使用权利要求1所述的七叶树SSR分子标记引物对步骤(1)中提取的DNA进行PCR扩 增； (3)用毛细管电泳检测步骤(2)扩增的PCR产物等 位基因数目； (4)根据每对S SR引物的带 型结果， 组合形成七叶树种质资源的S SR指纹图谱。 (5)根据每对SSR引物的带型结果， 进行的遗传多样性评价、 亲缘关系分析和分子标记 辅助育种。 4.如权利 要求3所述的应用， 其特征是： 所述步骤(2)中M13接头筛选PCR扩增程序采用： 95℃预变性5min； 9 5℃变性30s， 55℃退火30s， 72℃延伸30s， 9 5℃变性30s， 52℃退火30s， 72 ℃延伸30s， 20个循环； 72℃延伸10mi n。 5.如权利要求3所述的应用， 其特征是： 所述步骤(2)中M13接头筛选PCR扩增采用20μL 体系： DNA(20ng ·μL‑1)0.5μL， 2 ×Taq PCR Master Mix 10μL， 10μM浓度的M13F/F/R用量 0.2/0.1/0.3 μL， 灭菌去离 子水8.9 μL。 6.如权利要求3所述的应用， 其特征是： 所述步骤(3)中毛细管电泳检测的步骤为： 取步 骤(2)的PCR扩增产物各0.3 μL、 分子量内标0.5 μL和去离子甲酰胺9.5 μL混合加入PCR板， 95 ℃变性5mi n， 4℃冷却后离心， 1 ×Buffer缓冲液 上机检测。 7.如权利 要求3所述的应用， 其特征是： 所述检测为用毛细管电泳仪ABI3730XL检测， 所 述检测的参数如下： 工作电压15.0kV， 进样电压1.6kV， 喷射持续时间15s， 稳压电流3 0.0 μA。权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114921580 A 28.权利要求1 ‑7所述的任一七叶树SSR分子标记引物在七叶树种质资源鉴定、 遗传多样 性评价、 亲缘关系分析和分子标记辅助育种的应用。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114921580 A 3