(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210981171.1 (22)申请日 2022.08.16 (71)申请人 苏州康唯纳思生物科技有限公司 地址 215000 江苏省苏州市工业园区东旺 路8号七号楼 A幢5楼 (72)发明人 黄学文　唐磊　 (74)专利代理 机构 苏州智远 浅行知识产权代理 事务所(普通 合伙) 32693 专利代理师 郭海涛 (51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01) C12Q 1/686(2018.01) C12Q 1/6816(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12R 1/93(2006.01) (54)发明名称 一种引物和探针的组合及其在HPV分型检测 中的应用 (57)摘要 本发明公开了一种引物和探针的组合及其 在HPV分型检测中的应用， 属于生物技术领域， 引 物和探针的组合中， 引物包括上游引物、 下游引 物和内标基因的引物， 探针包括31条特异性探针 和内标基因的探针； 上游引物与GP5+同源， 下游 引物与GP6+同源； 上游引物的序列， 以及下游引 物的序列， 各自分别与至少一个HPV型别中的基 因序列有≦3个碱基的差异； 内标基因为人类管 家基因β‑globin。 该组合能够有效扩增31种HPV 基因型， 可在单一PCR反应管中同时扩增31种型 别HPV‑DNA， 并且引物和探针的组合对31种型别 的HPV均有很好的检测灵敏度和特异性， 使31种 型别的HPV感 染情况都能得到正确评估。 权利要求书3页 说明书10页 附图19页 CN 115161415 A 2022.10.11 CN 115161415 A 1.一种引物和探针的组合， 其特征在于： 所述引物包括上游引物、 下游引物和内标基因 的引物， 所述探针包括31条 特异性探针和内标基因的探针； 所述上游引物与GP5+同源， 所述下游引物与GP6+同源； 所述上游引物的序列与至少一个HPV型别中的基因序列有≦3个碱基的差异； 所述下游 引物的序列 与至少一个HPV型别中的基因序列有≦3个碱基的差异； 所述内标基因为人类管家基因β ‑globin。 2.如权利要求1所述的引物和探针的组合， 其特征在于： 所述上游引物选自下述6条引 物中的任意5条的组合， 所述6条引物的序列分别为： F1： TTTGTTACTGTGGTAGATACTAC； F2： TTTGTTACTGTTGTGGATACCAC； F3： TTTGTTACTTGTGTTGATACTAC； F4： TTTCTTACTGTAGTG GACACTAC； F5： TTTTTAACAGTTGTAGATACTAC； F6： TTTGTAACAGTTGTAGATAC CAC。 3.如权利要求2所述的引物和探针的组合， 其特征在于： 所述上游引物由F1、 F2、 F3、 F4 和F5组合而成。 4.如权利要求3所述的引物和探针的组合， 其特征在于： 所述上游引物中的F1、 F2、 F3、 F4和F5的浓度相等， 且等 量混合， 所述浓度的范围为0.1 ‑0.5 μM。 5.如权利要求1所述的引物和探针的组合， 其特征在于： 所述下游引物选自下述8条引 物中的任意6条的组合， 所述8条引物的序列分别为： R1： GAATATGATTTACAGTTTATTTTTC； R2： GAGTATGA ATTACAATTTATGTTTC； R3： GAATTTGATTTACAGTTTATTTTTC； R4： GAATATGAATTACAGTTTGTGTTTC； R5： GAATTTGATTTGCAGTTTATATTTC； R6:GAGTTTGATTTACAGTTTGTTTTTC； R7： GAATATGACT TGCAGTTTATATTTC； R8： GAATATGACT TACAGTTTGTTTTTC。 6.如权利 要求5所述的引物和探针的组合， 其特征在于： 所述下游引物由R1、 R2、 R3、 R4、 R5和R6组合而成。 7.如权利要求6所述的引物和探针的组合， 其特征在于： 所述下游引物中的R1、 R2、 R3、 R4、 R5和R6的浓度相等， 且等 量混合， 所述浓度的范围为0.1 ‑0.5 μM。 8.如权利要求1所述的引物和探针的组合， 其特征在于： 所述特异性探针分别与对应型 别的HPV基因序列特异性结合， 每条 特异性探针和其对应的HPV型别如下：权　利　要　求　书 1/3 页 2 CN 115161415 A 2权　利　要　求　书 2/3 页 3 CN 115161415 A 3