(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210622032.X (22)申请日 2022.06.01 (71)申请人 浙江农林大 学 地址 311300 浙江省杭州市临安区武肃街 666号 (72)发明人 徐川梅　黄坚钦　王克涛　苑轲　 (74)专利代理 机构 杭州奥创知识产权代理有限 公司 33272 专利代理师 赵梅 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种山核桃寡核苷酸探 针及其应用 (57)摘要 本 发 明 公 开 一 种 山 核 桃 ( C a r y a   cathayensis  Sarg.)寡核苷酸探针及其应用。 本 发明首次为山核桃(Carya  cathayensis  Sarg.) 成功开发了经济高效且通用性强的寡核苷酸探 针， 填补山核桃属植物染色体物理标记为零的空 白； 并应用开发的寡核苷酸探针对包括山核桃 (Carya cathayensis  Sarg.)在内的7个不同山 核桃种染色体结构进行分析， 并利用所开发的 OligoSHT ‑5S对不同山核桃(Carya  cathayensis   Sarg.)子代进行荧光原位杂交分析和统计， 对山 核桃(Carya  cathayensis  Sarg.)无融合生殖类 型进行精确鉴定和分析。 权利要求书2页 说明书14页 序列表3页 附图9页 CN 115058531 A 2022.09.16 CN 115058531 A 1.一种山核桃(Carya  cathayensis  Sarg.)寡核苷酸探针， 其特征在于， 选自以下六种 探针中的一种或多种， 所述六种探针具体为： 探针OligoSHT‑2， 如SEQ ID NO:1所示： GCCCGTGGGGCTTGTCAGGGTCAGGGGCAGTGTCAG GGCATG 探针OligoSHT‑3， 如SEQ ID NO:2所示： CATGTGCCCGTGGGGCTTGTCAGGGTCAGGGGCAGTGTCA AGGGGCATGC 探针OligoSHT‑4， 如SEQ ID NO:3所示： CAGTGTCAG GGCATGGCCCGTGGGGCTTGTCAGGGTCAGGGG 探针OligoSHT‑5， 如SEQ ID NO:4所示： CAGGGGCAGTGTCA AGGGGCATGCCATGGTGCCCGTGGGGCTTGTCAAGGT 探针OligoSHT‑5S由3条不同的探针序列组成： OligoSHT‑5S‑1， 如SEQ ID NO:5所示： TGCGATCATAC CAGCACCAATGCACCGGATCCCATTAGAACTCCGCAGTTAAGCGTG OligoSHT‑5S‑2， 如SEQ ID NO:6所示： TGCTTGGGCGAGAGTAGTACTAG GATGGGTGACCTCCTGGGAAGTCCTCGTGTTGCA OligoSHT‑5S‑3， 如SEQ ID NO:7所示： TGCGATCGTAC CAGCACTA ATGCATCG GATCCCATCAGAACTCCGCAGTTAAGCGTG 探针OligoSHT‑45S由8条不同的探针序列组成： OligoSHT‑45S‑1， 如SEQ ID NO:8所示： TTAACCAGACAAATCGCTCCACCAACTAAGAACGGCCATG OligoSHT‑45S‑2， 如SEQ ID NO:9所示： GAAACCTTGTTACGACTTCTCCTTCCTCTAAATGATA OligoSHT‑45S‑3， 如SEQ ID NO:10所示： GCGACGGGCGGTGTGTACA AAGGGCAGGGACGTAGTCA A OligoSHT‑45S‑4， 如SEQ ID NO:11所示： TTAACCAGACAAATCGCTCCACCAACTAAGAACGGCCATG OligoSHT‑45S‑5， 如SEQ ID NO:12所示： TGCCCTTCCGTCAATTCCTTTAAGTTTCAGCCTTGCGACC OligoSHT‑45S‑6， 如SEQ ID NO:13所示： TGGTCGGCATCGTTTATGGTTGAGACTAG GACGGTATCTG OligoSHT‑45S‑7， 如SEQ ID NO:14所示： GGATTGGGTAATTTGCGCGCCTGCTGCCTTCCTTG OligoSHT‑45S‑8， 如SEQ ID NO:15所示： TTCATACTTACACATGCATG GCTTAATCTTTGAGAC。 2.根据权利要求1所述的山核桃(Carya  cathayensis  Sarg.)寡核苷酸探针， 其特征在 于， 探针Ol igoSHT‑5S由OligoSHT‑5S‑1、 OligoSHT‑5S‑2和OligoSHT‑5S‑3等比例混合而成。 3.根据权利要求1所述的山核桃(Carya  cathayensis  Sarg.)寡核苷酸探针， 其特征在 于， 探针OligoSHT ‑45S由OligoSHT ‑45S‑1、 OligoSHT ‑45S‑2、 OligoSHT ‑45S‑3、 OligoSHT ‑ 45S‑4、 OligoSHT ‑45S‑5、 OligoSHT ‑45S‑6、 OligoSHT ‑45S‑7和OligoSHT‑45S‑8等比例混合权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115058531 A 2而成。 4.权利要求1 ‑3任一权利要求所述的山核桃(Carya  cathayensis  Sarg.)寡核苷酸探 针在山核桃(Carya  cathayensis  Sarg.)及山核桃(Carya  cathayensis  Sarg.)近缘种染 色体结构分析中的应用。 5.根据权利要求4所述的应用， 其特征在于， 所述山核桃(Carya  cathayensis  Sarg.) 近缘种包 括云南山核桃(Carya  tonkinen sis Lecte)、 湖南山核桃(Carya  hunanensis)、 大 别山山核桃(Carya  dabieshanensis)、 贵州山核桃(Carya  kweichowensis)。 6.山核桃(Carya  cathayensis  Sarg.)寡核苷酸探针OligoSHT ‑5S在山核桃(Carya   cathayensis Sarg.)无融合生殖类型及比例鉴定 中的应用， 其中， 探针OligoSHT ‑5S由3条 不同的探针序列组成： OligoSHT‑5S‑1， 如SEQ ID NO:5所示： TGCGATCATAC CAGCACCAATGCACCGGATCCCATTAGAACTCCGCAGTTAAGCGTG OligoSHT‑5S‑2， 如SEQ ID NO:6所示： TGCTTGGGCGAGAGTAGTACTAG GATGGGTGACCTCCTGGGAAGTCCTCGTGTTGCA OligoSHT‑5S‑3， 如SEQ ID NO:7所示： TGCGATCGTAC CAGCACTA ATGCATCG GATCCCATCAGAACTCCGCAGTTAAGCGTG。 7.根据权利要求6所述的应用， 其特征在于， 探针OligoSHT ‑5S由OligoSHT ‑5S‑1、 OligoSHT‑5S‑2和OligoSHT‑5S‑3等比例混合而成。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115058531 A 3