(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210704410.9 (22)申请日 2022.06.21 (71)申请人 武汉大学 地址 430072 湖北省武汉市武昌区珞珈山 街道八一路2 99号 (72)发明人 沈超　王星然　杨媚媚　赵慧仪　 赵佳曦　皮睿琦　陈凤鸣　 (74)专利代理 机构 武汉科皓知识产权代理事务 所(特殊普通 合伙) 42222 专利代理师 常海涛 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种对肝癌细胞进行鉴定的方法 (57)摘要 本发明公开了一种对肝癌细胞进行鉴定的 方法， 属于生命科学及医学领域。 本发明以MBL2 基因为肝癌细胞的标记物， 通过提取待鉴定细胞 的RNA、 反转录、 PCR扩增MBL2基因， 能够从多种肿 瘤组织中准确鉴定肝癌组织来源细胞。 本发明特 异性好， 只需要检测一个基因， 就可以判断细胞 是否来源于肝癌组织。 权利要求书1页 说明书4页 序列表2页 附图1页 CN 114908173 A 2022.08.16 CN 114908173 A 1.一种对肝癌细胞进行鉴定的分子标记物， 其特征在于： 所述的分子标记物为MBL2基 因。 2.一种对肝癌细胞进行鉴定的方法， 其特征在于： 包括如下步骤： 提取待鉴定细胞的 RNA， 通过反转录获得cDNA， 以cDNA为模板再通过PCR扩增MBL2基因， 能够扩增MBL2， 则待鉴 定细胞为 肝癌细胞。 3.权利要求1所述的分子标记 物在制备鉴定肝癌细胞的试剂中的应用。 4.根据权利要求3所述的应用， 其特 征在于： 所述的试剂包 含扩增MBL2基因的引物。 5.根据权利要求 4所述的应用， 其特 征在于： 扩增MBL2基因的引物的序列如下： MBL2‑S： 5'‑GATAGTAGC CTGGCTGCCTCAG‑3'， MBL2‑A： 5'‑TGTTGGGTTCACCCTCGTTC‑3'。 6.一种鉴定肝癌细胞的试剂， 其特 征在于： 包 含扩增MBL2基因的引物。 7.根据权利要求6所述的试剂， 其特 征在于： 扩增MBL2基因的引物的序列如下： MBL2‑S： 5'‑GATAGTAGC CTGGCTGCCTCAG‑3'， MBL2‑A： 5'‑TGTTGGGTTCACCCTCGTTC‑3'。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114908173 A 2一种对肝癌细胞进行鉴定的方 法 技术领域 [0001]本发明属于生命科 学及医学 领域， 具体涉及一种对肝癌细胞进行鉴定的方法。 背景技术 [0002]世界卫生组织2018年全球最新癌症报告指出,全球新增1810万例癌症病例， 死亡 人数达960万， 中 国癌症的发病率居世界第一位， 肝癌则 在世界范围内居男性恶性肿瘤发病 第5位， 女性第9位。 肝癌每年导致60万人死亡， 约82％的病例出现在发展中国家， 55％由乙 型肝炎病毒(HBV)引起且发生于中国。 对于肿瘤治疗方面的研究一直是医学研究方面的重 点， 肝细胞癌多 数患者起病隐匿， 在早期可能无典型症状， 少见体征变化， 进展 快， 出现症状 就医时， 病情往 往已到中晚期， 错过最佳治疗时间。 [0003]目前， 临床检查肝癌的手段一般为血清标志物甲胎 蛋白或者超声成像分析技术， 前者特异性差， 在胃肠道肿瘤等也会表达， 后者主要基于组织学和细胞特征， 灵敏度低， 导 致难以通过影 像学方法对对病理性 肝癌做出明确诊断， 极易发生漏诊、 误诊。 [0004]而随着细胞鉴定技术的发展， 快速 的鉴别出病变细胞， 鉴定出预测肝癌细胞的微 观指标这 一难题亟 待攻克。 [0005]在实验角 度， 细胞系的交叉污染和身份识别一直是容易被研究者忽视 的问题， 早 在20世纪60年代就已经出现Hela细胞污染其他细胞的例子， 国际细胞系认证委员会 (ICLAC)在2014年10月公布了数据(Version  7.2)， 列出438种错误建立的细胞系(false   cell lines)和37种被错认的细胞系(misidenti fied cell lines)， 并且至今每年都在更 新错误细胞的数据， 以及时提醒科研工作者不要使用错误细胞。 各种调查表明， 18％到36％ 的细胞系所标注的来源是错误的， 而且新的假细胞系很可能在不知道其被错认的情况下继 续被使用。 而这些被污染的细胞系还在被研究者使用， 并可能用于临床实验等用途， 使细胞 鉴定更加扑朔迷离。 给细胞相关的各种实验带来了太多问题， 可建立简单快捷的细胞鉴定 技术可以大大减少因为无法辨别 细胞来源而造成的科研损失、 工业损失和人力物力上的损 耗。 目前的细胞鉴定技术包括细胞学形态检验、 HLA分型检测、 核型分析、 同工酶法、 STR法 等， 主要针对的是种属间或者个体间细胞的鉴定， 而很少有针对细胞 组织来源的鉴定。 纵观 目前的鉴定方法， 我们发现其并不能满足科研工作中对细胞组织来源鉴定的需求。 到目前 为止， 对于细胞组织 来源的鉴定， 都没有统一的标准。 发明内容 [0006]本发明的目的在于提供一种对肝癌细胞进行鉴定的分子标记 物MBL2和方法。 [0007]为了达到上述目的， 本发明采取的技 术方案如下： [0008]一种对肝癌细胞进行鉴定的分子标记 物， 为MBL2基因。 [0009]一种对肝癌细胞进行鉴定的方法， 包括如下步骤： 提取待鉴定细胞的RNA， 通过反 转录获得cDNA， 以cDNA为模板再通过PCR扩增MBL2基因， 能够扩增MBL2， 则待鉴定细胞为肝 癌细胞。说　明　书 1/4 页 3 CN 114908173 A 3