(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210568628.6 (22)申请日 2022.05.24 (71)申请人 贵州大学 地址 550000 贵州省贵阳市花溪区大道南 段 (72)发明人 张福平　王文涛　龙广丽　林家栋　 朱丽莉　何琦　 (74)专利代理 机构 贵州派腾知识产权代理有限 公司 521 14 专利代理师 朱雪琼 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12N 15/11(2006.01) A01K 67/02(2006.01) (54)发明名称 一种基于SNP位点辅助培育地方优质白羽鸡 高产蛋品系的方法 (57)摘要 本发明公开了一种基于SNP位点辅助培育地 方优质白羽鸡高产蛋品系的方法， 包括以下步 骤： 以地方优质白羽鸡为母本， 罗曼白羽蛋鸡为 父本杂交， 在F1代中选留白羽自交， 提取F2代基 因组DNA， PCR扩增， 测序， 选留SNP位点基因型为 TT型的个体进行横交和扩繁， 经过3个世代以上 的选育， 得到遗传性状稳定的地方优质白羽鸡高 产蛋品系。 通过位于鸡5号染色体的ESRβ基因的 与产蛋性状相连锁的SNP标记位点 (E5 ： g.53215082)， 并将该标记应用于鸡产 蛋性状的 选育， 快速判断出该位点基因型， 提高地方优质 白羽鸡的产蛋性状， 进而加快该品种遗传改良进 度， 该育种方法可以有效快速推进贵州地方鸡高 产量等新品系的育种进程。 权利要求书1页 说明书8页 序列表1页 附图3页 CN 114941033 A 2022.08.26 CN 114941033 A 1.用于SNP位点辅助培育地方优质白羽鸡高产蛋品系的引物对， 其特征在于： 所述引物 对是用于鸡5号染色体的ESRβ 基因与产蛋性状相关 的SNP标记位点的PCR扩增， 该引物对的 核苷酸序列为： P ‑F 5’ ‑ACTTTTCCCCTTCTCCCC‑3’， P‑R 5’ ‑ACTGCACAT TTACAGTGCTATGT ‑3’。 2.一种含有权利要求1引物对的用于SNP位点辅助培育地方优质白羽鸡高产蛋品系的 试剂盒。 3.一种基于SNP位点辅助培育地方优质白羽鸡高产蛋品系的方法， 其特征在于， 包括以 下步骤： (1)以地方优质鸡白羽系为育种素 材， 组建基础育种群； (2)以步骤(1)育种群的地方优质白羽鸡为母本， 以罗曼 白羽蛋鸡为父本进行杂交， 在 F1代中选留白羽后代； (3)选用步骤(2)选留的白羽F1代自交， 得到F2 代； (4)提取步骤(3)的F2代鸡基因组DNA， 借助权利要求1的引 物对或权利要求2的试剂盒 对DNA进行PCR扩增反应， 采用直接测序法对扩增得到的PCR产物进行测序获得F2代5号 染色 体的ESRβ 基因与产蛋性状相关的SNP标记位点， 然后对SNP位点进行基因分型分析， 选留基 因型为TT型的个体， 剔除C C、 CT基因型个 体； (5)按照家系选择法对步骤(4)得到的TT型个体进行横交和扩繁， 经过3个世代以上的 选育， 得到遗传性状稳定的地方优质白羽鸡高产蛋品系。 4.根据权利要求3所述的一种基于SNP位点辅助培育地方优质白羽鸡高产蛋品系的方 法， 其特征在于： 在步骤(1)， 所述地方优质白羽鸡为兴义矮脚鸡白羽系、 黔东南小香鸡白羽 系及以上两种白羽鸡为父本或母本 培育的白羽鸡品种品系。 5.根据权利要求3所述的一种基于SNP位点辅助培育地方优质白羽鸡高产蛋品系的方 法， 其特征在于： 在步骤(4)， 基因组DNA提取是通过翅静脉采血方式对所有试验鸡采血， 使 用蛋白酶K法提取 血液DNA，‑20℃保存备用。 6.根据权利要求3所述的一种基于SNP位点辅助培育地方优质白羽鸡高产蛋品系的方 法， 其特征在于： 在步骤(4)， 每10μL的PCR扩增体系含有： Primer  Mix 5μL， Sterilized   ddH2O 3.4 μL， P‑F 0.3 μL， P‑R 0.3 μL， DNA模板1 μL。 7.根据权利要求3所述的一种基于SNP位点辅助培育地方优质白羽鸡高产蛋品系的方 法， 其特征在于： 在步骤(4)， 所述PCR反应体系为： 94℃预变性10min， 30个循环(94℃变性 45s， 54℃退火40s， 72℃延伸5 0s)， 72℃延伸8mi n， 4℃保存。 8.根据权利要求3所述的一种基于SNP位点辅助培育地方优质白羽鸡高产蛋品系的方 法， 其特征在于： 在步骤(4)， 所述SNP标记位点是鸡5号染色体的ESRβ基因上的E5： g.53215082。 9.根据权利要求3所述的一种基于SNP位点辅助培育地方优质白羽鸡高产蛋品系的方 法， 其特征在于： 在步骤(4)， SNP标记 位点基因分型有TT型、 CC型、 CT型， 通过检测分析， 确定 F2代ESRβ 基因E5： g.53215082位点的TT基因型个体产蛋量较高， 因此选留SNP标记位点基因 型为TT型的个体， 剔除C C、 CT基因型个 体。 10.一种鸡5号染色体上ESRβ 基因SNP位点(E5： g.53215082)在鸡辅助育种中 的应用， 其 特征在于： 利用鸡5号染色体上ESRβ 基因SNP位点(E5： g.53215082)辅助选育地方优质白羽 鸡高产蛋品系。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114941033 A 2一种基于SNP位点辅助培育地方优质白羽鸡高产蛋品系 的 方法 技术领域 [0001]本发明属于家禽分子育种技术领域， 尤其涉及一种基于SNP位点辅助培育地方优 质白羽鸡高产蛋品系的方法。 背景技术 [0002]家禽不同品种间杂交主要是利用基因的非加性效应， 产生杂种优势。 随着我国畜 禽改良工作的深入， 杂种优势已经在畜禽生产上有了大规模应用。 在地方鸡的杂交改良中， 借助外来鸡生长快、 产蛋量高等特点， 开展杂种优势利用， 可有效提高地方鸡资源利用价 值， 杂交后代在43周龄产蛋量、 开产蛋重等传统杂交优势指标均有不同程度的提高。 [0003]鸡5号染色体上的ESRβ基因， 属于甾体激素核酸受体， 具有促进生殖器官发育成 熟， 促进雌性副性征的出现， 维持性行为等功能。 通过有效挖掘ESRβ 基因上与产蛋等性状相 关的单核苷酸多态性(SNP)标记， 并将相关标记用于杂交后代选择来实现产蛋量等繁殖性 状的早期选择。 该方法可使目标性状基因纯合进展加快， 在避免商品代出现性状分离的同 时 ， 更 快更高 效的 选育出目 标 性 状 优良 的 鸡品 种新品 系。专 利申 请公 开 了 CN201510756381.0公开了一个鸡翻毛 性状相关的分子标记及其应用， 在E22C19W28_E50C23 区域鸡的KRT基因连锁群(genbank序列号AADN03009152.1)第56648位碱基处有一个 A56648‑G56648的碱基替换， 该替换引起SNP多态性， 通过采用检测引物在该位点碱基替换 情况来作鸡标记辅助选择关联分析， 判断鸡翻毛性状。 但是该方案并不能用于培育地方优 质白羽鸡高产蛋品系的方法。 [0004]兴义矮脚鸡白羽系为代表的贵州地方鸡白羽系是从以兴义矮脚鸡为代表的贵州 地方鸡选育出 的一种节粮型蛋肉兼用型鸡， 一般作为地方鸡配套系母本使用， 其典型特征 为隐性白羽， 体型适中， 遗传性能稳定， 但产蛋性能不突出， 导致制种成本较高。 关于地方优 质白羽鸡高产蛋品系培育公开的文 献有一些， 但是， 现有技术中还没有利用SNP标记辅助选 育的相关技 术公开， 且选 育方法比较繁琐， 选 育所需时间比较长， 大 大提高了 选育成本。 发明内容 [0005]本发明为解决上述技术问题， 提供了一种基于SNP位点辅助培育地方优质白羽鸡 高产蛋品系的方法。 本发明通过实验鉴定了与以兴义矮脚鸡白羽系为代表的贵州地方鸡白 羽系产蛋性状连锁相关的1个SNP标记， 并将该标记应用于相关地方鸡产蛋性状的选育， 具 有良好育种效果。 本发明首次得到与优质地方白羽鸡产蛋性状相关的SNP位点， 具体是鸡5 号染色体的ESRβ 基因上的E5： g.53215082位点C/T突变， 包括检测该突变位点的引物， 利用 引物检测该位点的基因型， 即可在生长早期选留该位点的优势表型基因型TT的个体， 加快 产蛋性能优秀的新品系选育进度， 为地方鸡选育提供了一种新途径。 该方法可以有效快速 推进贵州地方鸡高产蛋等 新品系的育种进程。 [0006]为了能够达 到上述所述目的， 本发明采用以下技 术方案：说　明　书 1/8 页 3 CN 114941033 A 3