(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210681546.2 (22)申请日 2022.06.16 (71)申请人 广州白云山拜迪生物医药有限公司 地址 510000 广东省广州市番禺区万宝北 街1号 (72)发明人 丘力功　丁姝元　陈宋彬　郝宇　 陆启蓝　赵海莲　 (74)专利代理 机构 广州嘉权专利商标事务所有 限公司 4 4205 专利代理师 蒋斌 (51)Int.Cl. C12Q 1/6816(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种基于SENSR和CRISPR技术的核 酸检测试 剂、 试剂盒及应用 (57)摘要 本发明属于基因检测技术领域， 具体涉及一 种基于SENSR和CRISPR技术的核酸检测试剂、 试 剂盒及应用。 公开了一种检测核酸的试剂； 该试 剂基于SENSR和CRISPR技术检测核酸， 通过将现 有的SENSR中报告探针的染料结合的RNA适配体 模板序列替换为crRNA识别的通用序列， Cas蛋白 在CrRNA的引导下， 识别目标序列后， 激发旁切割 活性的Cas蛋白， 通过切割特定的报告探针产生 检测信号； 并且， 与SENSR法以及改良的SENSR法 相比， 采用该试剂后空白或阴性对照无显著的扩 增信号， 而较低拷贝的目标核酸上样后却可有显 著信号， 可实现高灵敏的目标核酸一锅法检测； 同时， 该试剂可以同时两种或两种以上目标核 酸。 权利要求书3页 说明书18页 序列表4页 CN 115029416 A 2022.09.09 CN 115029416 A 1.一种检测核酸的试剂， 包 含： 检测目标核酸的探针对和crRNA； 所述探针对 包含启动子 探针和报告探针； 所述启动子 探针包含上游杂交序列和T7启动子序列； 所述报告探针包 含下游杂交序列和通用序列； 所述crRNA包 含锚定序列和spacer序列； 所述上游杂交序列 与所述目标核酸的部分序列互补； 所述下游杂交序列 与所述目标核酸的剩余序列互补； 所述通用序列 与所述spacer序列相同； 所述锚定序列 与Cas蛋白特异性识别。 2.根据权利要求1所述的试剂， 其特 征在于： 所述上游杂交序列的碱基数为18～ 24； 优选地， 所述上游杂交序列与所述目标核酸的5 ’端互补， 所述下游杂交序列与所述目 标核酸的3 ’端互补； 或 所述上游杂交序列与所述目标核酸的3 ’端互补， 所述下游杂交序列与所述目标核酸的 5’端互补； 优选地， 所述T7启动子序列如SEQ  ID NO.2的第25～86位所示。 3.根据权利要求1或2所述的试剂， 其特 征在于： 所述目标核酸的种类大于等于2时， 所述试剂包含： N组检测目标核酸的探针对和 crRNA， N等于所述目标核酸的种类； 优选地， 所述目标核酸的种类大于等于2时， 不同目标核酸的探针对的报告探针的通用 序列不同； 优选地， 所述目标核酸的种类大于等于2时， 不同目标核酸的crRNA的锚定序列不同。 4.根据权利要求3所述的试剂， 其特 征在于： 所述目标核酸的序列如SEQ  ID NO.1所示时， 所述上游杂交序列如SEQ  ID NO.2的第1 ～24位所示； 所述下游杂交序列如SEQ  ID NO.4的第31～48位所示； 优选地， 所述目标核酸的序列如SEQ  ID NO.6所示时， 所述上游杂交序列如SEQ  ID  NO.7的第1～19位所示； 所述下游杂交序列如SEQ  ID NO.8的第31～5 0位所示； 优选地， 所述目标核酸的序列如SEQ  ID NO.10所示时， 所述上游杂交序列如SEQ  ID  NO.11的第1～ 20位所示； 所述下游杂交序列如SEQ  ID NO.13的第31～5 0位所示； 优选地， 所述目标核酸的序列如SEQ  ID NO.1或SEQ  ID NO.6所示时， 所述通用序列如 SEQ ID NO.4的第1～3 0位所示； 优选地， 所述目标核酸的序列如SEQ  ID NO.10所示时， 所述通用序列如SEQ  ID NO.13 的第1～3 0位所示； 优选地， 所述目标核酸的序列如SEQ  ID NO.1或SEQ  ID NO.6所示时， 所述锚定序列如 SEQ ID NO.5的第1～3 5位所示； 优选地， 所述目标核酸的序列如SEQ  ID NO.10所示时， 所述锚定序列如SEQ  ID NO.14 的第31～6 6位所示； 优选地， 所述目标核酸包含： 序列如SEQ  ID NO.6所示的核酸和序列如SEQ  ID NO.10所 示的核酸时， 所述试剂包含检测序列如SEQ  ID NO.6所示的目标核酸的探针对和crRNA， 以权　利　要　求　书 1/3 页 2 CN 115029416 A 2及检测序列如SEQ  ID NO.10所示的目标核酸的探针对和crRNA， 所述检测序列如SEQ  ID NO.6所示 的目标核酸 的探针对包含检测序列如SEQ  ID NO.6 所示的目标核酸的启动子 探针和报告探针； 所述检测序列如SEQ  ID NO.6所示的目标核酸的启动子探针的上游杂交序列如SEQ  ID  NO.7的第1～19位所示； 所述检测序列如SEQ  ID NO.6所示的目标核酸的报告探针的下游杂 交序列如SEQ  ID NO.8的第31～50位所示； 所述检测序列如SEQ  ID NO.6所示的目标核酸的 报告探针的通用序列如SEQ  ID NO.4的第1～3 0位所示； 所述检测序列如SEQ  ID NO.6所示的目标核酸的crRNA的锚定序列如SEQ  ID NO.5的第 1～35位所示； 所述检测序列如SEQ  ID NO.10所示的目标核酸的探针对包含检测序列如SEQ  ID  NO.10所示的目标核酸的启动子 探针和报告探针； 所述检测序列如SEQ  ID NO.10所示的目标核酸的启动子探针的上游杂交序列如SEQ   ID NO.11的第1～20位所示； 所述检测序列如SEQ  ID NO.10所示的目标核酸的报告探针的 下游杂交序列如SEQ  ID NO.13的第31～50位所示； 所述检测序列如SEQ  ID NO.10所示的目 标核酸的报告探针的通用序列如SEQ  ID NO.13的第1～3 0位所示； 所述检测序列如SEQ  ID NO.10所示的目标核酸的crRNA的锚定序列如SEQ  ID NO.14的 第31～66位所示。 5.权利要求1～4中任一项所述的试剂在制备检测核酸的产品中的应用。 6.一种试剂盒， 其特 征在于： 包 含权利要求1～4中任一项所述的试剂。 7.根据权利要求6所述的试剂 盒， 其特征在于： 所述试剂 盒还包括信号报告探针和权利 要求1～4中的Cas蛋白。 8.根据权利要求7 所述的试剂盒， 其特 征在于： 所述信号报告探针包含核酸序列， 所述核酸序列的5 ’端标记荧光报告基团， 3 ’端标记 淬灭基团； 优选地， 所述 荧光报告基团包 含FAM、 HEX、 ROX、 C Y5、 VIC、 JOE、 TAMRA中的任一种； 优选地， 所述淬灭基团包 含BHQ1、 BHQ2中的至少一种； 优选地， 所述信号报告探针的核酸序列为A AAAA或UUUUU； 优选地， 所述目标核酸的种类大于等于2时， 所述Cas蛋白包含N种Cas蛋白， N种Cas蛋白 互不相同， N 等于所述目标核酸的种类； 优选地， 所述Cas蛋白包 含LwaCas13a、 Ps mCas13b、 C caCas13b中的至少一种； 优选地， 所述目标核酸的种类大于等于2时， 所述信号报告探针包含N种信号报告探针， N种信号报告探针的序列以及荧 光报告基团均互不相同， N 等于所述目标核酸的种类； 优选地， 所述目标核酸的序列如SEQ  ID NO.1或SEQ  ID NO.6所示时， 所述Cas蛋白为 LwaCas13a； 优选地， 所述目标核酸的序列如SEQ  ID NO.1或SEQ  ID NO.6所示时， 所述信号报告探 针为FAM‑5’UUUUU‑3’BHQ1； 优选地， 所述目标核酸的序列如SEQ  ID NO.10所示时， 所述Cas蛋白为Ps mCas13b； 优选地， 所述目标核酸的序列如SEQ  ID NO.10所示时， 所述信号报告探针为HEX ‑5’ AAAAA‑3’BHQ1；权　利　要　求　书 2/3 页 3 CN 115029416 A 3