(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210603056.0 (22)申请日 2022.05.30 (71)申请人 成都市食品检验研究院 地址 610000 四川省成 都市温江区芙蓉大 道二段10号 (72)发明人 张彪　杨华雨　尚柯　万渝平　 张敏　李瑶　欧明月　 (74)专利代理 机构 成都高远知识产权代理事务 所(普通合伙) 51222 专利代理师 肖雯　张娟 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6844(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种基于MIRA技术快速鉴别肉制 品中羊源 性成分的方法 (57)摘要 本发明提供了一种基于MIRA技术快速鉴别 肉制品中羊源性成分的方法， 属于食品安全生物 技术领域。 本发 明首先提供了一种鉴别肉制品中 羊源性成分的引物探针组合， 它包括正向引物、 反向引物和探针； 所述正向引物的核苷酸序列如 SEQ ID NO.3所示； 所述反向引物的核苷酸序列 如SEQ IDNO.6所示； 所述探针的核苷酸序列如 SEQ ID NO.7所示。 本发明还提供了含该引 物探 针组合的试剂盒以及具体鉴别方法。 本发明鉴别 肉制品中羊源性成分的检测方法条件温和、 操作 简便、 特异性强、 灵敏度高、 可靠性好， 结果可视 化， 十分利于现场检测。 本发明检测方法为现场 快速、 简捷、 灵敏的检测肉制品羊源性成分提供 一种新的选择， 具有广阔的应用前 景。 权利要求书1页 说明书10页 序列表2页 附图7页 CN 115094147 A 2022.09.23 CN 115094147 A 1.一种鉴别肉制品中羊源性成分的引物探针组合， 其特征在于： 它 包括正向引物、 反向 引物和探针； 所述正向引物的核苷酸序列如S EQ ID NO.3所示； 所述反向引物的核苷 酸序列 如SEQ ID NO.6所示； 所述探针的核苷酸序列如SEQ  ID NO.7所示。 2.权利要求1所述的引物探针组合在鉴别肉制品中羊源性成分的用途。 3.根据权利要求2所述的用途， 其特征在于： 所述用途为在制备鉴别肉制品中羊源性成 分的试剂盒中的用途。 4.根据权利要求2或3所述的用途， 其特征在于： 所述鉴别肉制品中羊源性成分的方法 为多酶恒温快速扩增可视化 技术。 5.根据权利要求4所述的用途， 其特征在于： 所述多酶恒温快速扩增可视化技术为多酶 恒温快速扩增技 术结合侧向流层析技 术。 6.一种鉴别肉制品中羊源性成分的试剂 盒， 其特征在于： 所述试剂 盒包括权利要求1所 述的引物探针组合。 7.根据权利要求6所述的试剂 盒， 其特征在于： 所述鉴别肉制品中羊源性成分的方法为 多酶恒温快速扩增可视化 技术。 8.根据权利要求7所述的试剂 盒， 其特征在于： 所述多酶恒温快速扩增可视化技术为多 酶恒温快速扩增技 术结合侧向流层析技 术。 9.一种鉴别肉制品中羊源性成分的方法， 其特 征在于： 它包括如下步骤： (1)提取待测样品的DNA作为模板； (2)将权利要求1所述的引物探针组合加入到含DNA模板的扩增体系中； (3)使用多酶恒温快速扩增可视化 技术进行检测； (4)读取结果。 10.根据权利要求9所述的方法， 其特征在于： 步骤(2)中， 所述扩增体系中正向引物、 反 向引物、 探针和DNA模板的体积比为0.1～0.5： 0.1～0.5： 0.01～0.2： 1； 所述正向引物和反 向引物的体积比为1： 1； 和/或， 步骤(2)中， 所述扩增体系的反应温度为30～40℃； 和/或， 所述扩增时间为1～ 10min； 优选地， 步骤(2)中， 所述扩增体系中正向引物、 反向引物、 探针和DNA模板的体积比为 0.25～0.5： 0.25～0.5： 0.075～0.15： 1； 所述 正向引物和反向引物的体积比为1： 1； 和/或， 步骤(2)中， 所述扩增体系的反应温度为37℃； 和/或， 所述扩增时间为5mi n； 和/或， 步骤(2)中， 所述扩增体系中引物的浓度 为10 μmol/L； 和/或， 所述扩增体系中探 针的浓度为10 μmo l/L。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115094147 A 2一种基于MIRA技术快速鉴别肉制品中 羊源性成分的方 法 技术领域 [0001]本发明属于食品安全生物技术领域， 具体涉及一种基于MIRA技术快速鉴别肉制品 中羊源性成分的方法。 背景技术 [0002]随着市场全球化及贸易自由化的不断发展， 消费者对肉制品产品质量和真实性越 来越重视， 肉制品安全提升到一个新的高度。 近年来， 国内外肉类掺假事件时有发生， 引发 社会广泛关注， 对食品安全和食品贸易造成严重危害。 肉类掺假的方式越来越多， 形式越来 越复杂。 目前， 肉制品的掺假主要表现为原料肉掺假、 组织替换等， 这些肉类真实性问题不 但严重地侵害了消费者利益， 更是给肉制品食用安全带来潜在危害， 同时也可能带来宗教 信仰和道德标准方面的风险。 [0003]因此， 肉制品动物源性成分检测变得越来越重要， 核酸检测可以从样品中检测出 痕量目标分子， 具有灵敏特异 等诸多优势， 已成为食品真实性研究中必 要的技术手段， 并在 检测领域中得到广泛应用。 但是， 传统的核酸检测技术对实验室环境、 仪器及人员要求较 高， 无法满足现场检测监管需求。 [0004]一些新型检测方法， 如重组酶聚合酶扩增技术(Recombinase  Polymerase   Amplification， RPA)、 多酶恒温快速扩增技术(Multienzyme  Isothermal  Rapid  Amplification， MIRA)等， 由于不需要高温变性、 退火等步骤， 对精密仪器依赖程度大大降 低， 是实现现场即时检测的有效技术手段。 同时结合侧向流层析技术(Lateral  Flow  Dipstick， LFD)， 不仅可以达到简捷、 灵敏、 特异的检测目的， 而且能更好地为现场动物源成 分检测提供可视化应用服务。 但是这些方法的关键在于寻找到合适的引物， 引物的选择会 影响检测速度和灵敏度。 目前， 寻找到合 适的引物是肉制品动物源性成分检测的难点。 [0005]寻找到一种合适的引 物， 提供一种新的肉制品中羊源性成分检测方法， 为现场快 速、 简捷、 灵敏的检测肉制品中羊源性成分提供一种新的选择， 对于食品安全具有重要意 义。 发明内容 [0006]本发明的目的是提供一种基于 MIRA技术快速鉴别肉制品中羊源性成分的方法。 [0007]本发明提供了一种鉴别肉制品中羊源性成分的引 物探针组合， 它包括正向引 物、 反向引物和探针； 所述正向引物的核苷 酸序列如S EQ ID NO.3所示； 所述反向引物的核苷 酸 序列如SEQ  ID NO.6所示； 所述探针的核苷酸序列如SEQ  ID NO.7所示。 [0008]本发明还提供了前述的引物探针组合在鉴别肉制品中羊源性成分的用途。 [0009]进一步地， 所述用途为在制备鉴别肉制品中羊源性成分的试剂盒中的用途。 [0010]进一步地， 所述鉴别肉制品中羊源性成分的方法为多酶恒温快速扩增可视化技 术。 [0011]进一步地， 所述多酶恒温快速扩增可视化技术为多 酶恒温快速扩增技术结合侧向说　明　书 1/10 页 3 CN 115094147 A 3