(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210921960.6 (22)申请日 2022.08.02 (71)申请人 南京科冠生物医药 科技有限公司 地址 210046 江苏省南京市栖霞区仙林街 道纬地路9号江苏生命 科技园C6栋408 室 (72)发明人 石正丽　李贝　胡犇　周鹏　 (74)专利代理 机构 南京佰腾智 信知识产权代理 事务所(普通 合伙) 32509 专利代理师 郭林 (51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/11(2006.01) B01L 3/02(2006.01)C12R 1/93(2006.01) (54)发明名称 一种同时检测新型冠状病毒及SARS样冠状 病毒的核酸组合物、 试剂盒以及检测方法 (57)摘要 本发明涉及医药生物 技术领域， 尤其涉及一 种同时检测新型冠状病毒及SARS样冠状病毒的 核酸组合物、 试剂盒以及检测方法， 模板RNA的提 取； 采用一步法荧光定量方法， 配制反应体系， 含 有上述的3条特异性引物(SEQ  ID No.5～7)， 如 果Ct≤37， 则可初步判定为新冠病毒或SARS样冠 状病毒核 酸阳性； 用SEQ  ID No.1～4的引物 探针 进行再次的检测， 如果Ct≤37， 则可明确判定为 新冠病毒或SARS样冠状病毒核酸阳性； 用SEQ  ID  No.1， 2， 4的引物 探针进行再次的检测， 如果Ct ≤ 37， 则可明确判定为新冠病毒核酸阳性， 否则为 其他SARS样冠状病毒核酸阳性。 本发明对于新型 冠状病毒和其他SARS样冠状病毒的核酸诊断具 有较高的参 考价值， 适于推广应用。 权利要求书2页 说明书5页 附图3页 CN 115198034 A 2022.10.18 CN 115198034 A 1.一种同时检测新型冠状病毒及SARS样冠状病毒的核酸组合物， 其特征在于， 包括以 下引物和探针序列： 上游引物： RdRp_SARSr ‑F： 5`‑GTGARATG GTCATGTGTG GCGG‑3`(SEQ ID No.1)； 下游引物： RdRp_SARSr ‑R:5`‑CARATGTTAAASACACTAT TAGCATA‑3`(SEQ ID No.2)； 特异性探针： RdRP_SARSr ‑P1:5`‑FAM‑CCAGGTGGWAC RTCATCMGGTGATGC ‑BHQ1‑3`(SEQ ID  No.3)； 特异性探针： RdRp_SARSr ‑P2:5`‑FAM‑CAGGTGGAACCTCATCAGGAGATGC ‑BHQ1‑3`(SEQ ID  No.4)； 上游引物： E_Sarbeco_F： 5` ‑ACAGGTACGTTAATAGTTAATAGCGT‑3`(SEQ ID No.5)； 下游引物： E_Sarbeco_R:5` ‑ATATTGCAGCAGTACGCACACA ‑3`(SEQ ID No.6)； 特异性探针： E_Sarbeco_P1:5` ‑FAM‑ACACTAGCCATCCTTACTGCGCTTCG ‑BHQ1‑3`(SEQ ID  No.7)。 2.根据权利要求1所述的同时检测新型冠状病毒及SARS样冠状病毒的核酸组合物， 其 特征在于， 根据新冠病毒和SARS样冠状病毒的E基因和ORF1b基因的保守区分别设计3组特 异性引物和探针是SEQ  ID No.5～7、 SEQ  ID No.1～4以及SEQ  ID No.1， 2， 4。 3.一种用于新冠病毒和SARS样冠状病毒核酸同时检测的试剂盒， 其特征在于， 包括权 利要求1和2所述的一种同时检测新型 冠状病毒及SARS样冠状病毒的核酸组合物。 4.一种用于新冠病毒和SARS样冠状病毒 核酸检测的方法， 具体包括如下步骤： S1.模板RNA的提取： 提取待检样品的RNA， 所述待检样品是明确或疑似为新冠病毒或其 他SARS样冠状病毒感染的样本； S2.采用一步法荧光定量方法， 配制反应体系， 含有上述的3条特异性引物(SEQ  ID  No.5～7)， 其中， SEQ  ID No.5和6的终浓度为400nM， SEQ  ID No.7的终浓度为200nM， 在ABI 或biorad荧光定量上进行检测， 如果Ct≤37， 则可初步判定为新冠病毒或SARS样冠状病毒 核酸阳性； S3.采用和步骤S2同样的方法， 用SEQ  ID No.1～4的引物探针进行再次的检测， 其中， SEQ ID No.1和2的终浓度分别为600nM和800nM， SEQ  ID No.3和4的终浓度分别为100nM， 如 果Ct≤37， 则可明确判定为 新冠病毒或SARS样冠状病毒 核酸阳性； S3.采样用和步骤S2同样的方法， 用SEQ  ID No.1， 2， 4 的引物探针进行再次的检测， 其 中， SEQ ID No.1和2的终浓度分别为600nM和800nM， SEQ  ID No.4的终浓度为100nM， 如果Ct ≤37， 则可明确判定为 新冠病毒 核酸阳性， 否则为 其他SARS样冠状病毒 核酸阳性。 5.一种用于将待检样品移入至权利要求1所述试剂 盒的移液管， 其特征在于， 包括圆筒 状的承液管、 活塞杆、 塞体以及针头， 所述塞体可滑动的配置在所述圆筒状的承液管中， 所 述活塞杆的下端连接于所述塞体， 其上端延伸至所述圆筒状的承液管外， 所述圆筒状的承 液管的下端设有锥形状的输液嘴， 所述输液嘴上设有可拆卸的针头 。 6.根据权利要求5所述的移液管， 其特征在于， 所述输液嘴通过安装本体可拆卸的连接 于所述针头， 所述安装本体呈圆柱状， 其上设有贯穿的连接通道， 所述安装本体的上端固定 于所述输液嘴， 所述连接通道连接于所述输液嘴， 所述连接通道包括连接通道一和连接通 道二， 所述连接通道一位于所述连接通道二的上方， 且所述连接通道一的直径大于所述连 接通道二的直径， 所述针头可拆卸的配置在所述连接通道二中。权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115198034 A 27.根据权利要求6所述的移液管， 其特征在于， 所述针头包括连接部和针管， 所述针管 通过所述连接 部连接于所述连接通道二， 所述连接 部与所述 安装本体之间设有密封圈。 8.根据权利要求7所述的移液管， 其特征在于， 所述安装体的下端配置有对称的安装 槽， 所述安装槽通过连接弹簧锁紧块， 所述连接部上设有配置有与所述锁紧块匹配的锁紧 槽。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115198034 A 3