(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210725054.9 (22)申请日 2022.06.23 (71)申请人 湖南文理学院 地址 415000 湖南省常德市武陵区洞庭大 道3150号 申请人 湖南农业大 学 (72)发明人 曾丹　王晓清　曾嘉伟　胡亚洲　 秦溱　王佩　梁艺馨　 (74)专利代理 机构 北京和联顺知识产权代理有 限公司 1 1621 专利代理师 公茂海 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6879(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01)C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种中华鳖遗传性别相关的SNPs标记及其 引物和应用 (57)摘要 本发明公开了一种中华鳖遗传性别相关的 SNPs标记及其引物和应用， 中华鳖遗传性别相关 的SNPs标记为SEQ  ID NO:1所示序列自5 ’端起第 164、 167、 172、 173、 174、 177位碱基为A/G、 C/T、 T / C、 T/C、 G/A、 C/T。 当所述SNPs标记为AG、 CT、 TC、 TC、 GA、 CT基因型的个体为 雌性中华鳖， SNPs标记 为AA、 CC、 TT、 TT、 GG、 CC基因型的个体为雄性中华 鳖。 本发明通过相应的特异性标记引物组可快 速、 简便、 准确鉴别中华鳖遗传性别。 本发明检测 中华鳖遗传性别的方法可用于对不同生长阶段、 不同群体、 大量样本的中华鳖性别鉴定与筛选， 对开展中华鳖的性别控制育种工作、 发展单性养 殖具有重要意 义。 权利要求书1页 说明书4页 序列表1页 附图3页 CN 114990233 A 2022.09.02 CN 114990233 A 1.一种中华鳖遗传性别相关的SNPs标记， 其特征在于， 所述SNPs标记为SEQ  ID NO:1所 示序列自5 ’端起第164、 167、 172、 173、 174、 17 7位碱基为A/G、 C /T、 T/C、 T/C、 G/A、 C/T。 2.根据权利 要求1所述的一种中华鳖遗传性别相关的SNP s标记， 其特征在于， 所述SNPs 标记为AG、 CT、 TC、 TC、 GA、 CT基因型的个体为雌性中华鳖， SNPs标记为AA、 CC、 TT、 TT、 GG、 CC基 因型的个 体为雄性中华鳖。 3.一种用于检测权利要求1 ‑2任一所述的一种中华鳖遗传性别相关的SNPs标记的引物 组， 其特征在于， 所述引物组的核苷酸序列如SEQ  ID NO:2‑4所示。 4.一种用于中华鳖遗传性别鉴定的试剂盒， 其特征在于， 所述的试剂盒中包括用于鉴 定权利要求1 ‑2任一项所述的SNPs标记的试剂。 5.根据权利要求4所述的试剂盒， 其特征在于， 所述的试剂盒中包括权利要求3所述的 引物。 6.一种鉴别中华鳖遗传性别的方法， 其特征在于， 通过检测权利要求1 ‑2任一项所述的 SNPs标记进行中华鳖的遗传性别鉴定 。 7.根据权利要求6所述的一种鉴别中华鳖遗传性别的方法， 其特征在于， 包括以下步 骤： 步骤1： 提取待测中华鳖的基因 组DNA； 步骤2： 利用引物组， 将所述待测中华鳖的基因 组DNA进行PCR扩增， 获得PCR扩增产物； 步骤3： 对所述PCR扩增产物进行电泳检测， 根据PCR扩增条带的数目及大小来确定中华 鳖的遗传性别。 8.根据权利要求7所述的一种鉴别中华鳖遗传性别的方法， 其特征在于， 所述的引物 组 核苷酸序列如SEQ  ID NO:2‑4所示； 所述的PCR扩增条件为： 94℃预变性5min； 94℃变性30s， 69℃、 67℃、 65℃各退火循环5次， 63℃退火循环15次30s， 72℃延伸30s， 共30个循环； 72℃延 伸7min。 其中所述PCR扩增条带为大小分别为265bp和401bp的两条条带， 则所述SNPs标记为 AG、 CT、 TC、 TC、 GA、 CT基因型， 该个体为遗传雌性中华鳖； 所述PCR扩增条带为大小 401bp的一 条条带时， SNPs标记为A A、 CC、 TT、 TT、 GG、 CC基因型， 该个 体为遗传雄 性中华鳖。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114990233 A 2一种中华鳖遗传性别相关的SNPs标记及其引物和应用 技术领域 [0001]本发明涉及S NP技术领域， 尤其涉及一种中华鳖遗传性别相关的S NPs 标记及其引 物和应用。 背景技术 [0002]中华鳖(Pelodiscus  sinensis)俗称甲鱼、 团鱼、 脚鱼等， 隶属脊椎动物门 (Vertebrata)， 爬行纲(Reptilia)， 龟鳖目(Testudines)， 鳖科  (Trionychidae)， 鳖属 (Pelodiscus)， 是水陆两栖、 用肺呼吸的爬行动物， 主要分布于中国、 日本、 朝鲜、 俄罗斯和 越南等地。 中华鳖蛋白质含量高， 能够提供人体所需多种氨基酸， 具有极高的营养价值， 因 此广受消费者的喜爱。 [0003]中华鳖雌雄存在明显 的生长差异， 中华鳖的性别决定机制尚未阐明， 进行性别控 制技术探讨， 实现雄性单性化生产， 是中华鳖育种的重要发展方向。 在中华鳖的养殖过程 中， 中华鳖雄性普遍 快于雌性， 在成熟期表现差异尤为明显， 雄鳖比雌鳖生长快25 ‑30％， 且 雄鳖裙边宽厚、 脂肪少， 具有更高的营养价值， 市场价值高于雌性， 实行中华鳖单性苗种培 育对中华鳖产业发展有重要的经济意义。 但在性腺发育成熟之前， 其性别通过肉眼更难判 别， 胚胎和幼体阶段雌雄鱼形态上几乎没有区别。 这给其单性育种技术的开发带来了很大 困难， 也阻碍了需要在性腺发育分化之前进 行遗传性别识别的性别决定分子机制研究 的开 展。 [0004]因此， 开发一种可以准确鉴别其遗传性别的分子标记用于中华鳖性别控制育种具 有极大的生产应用价值， 对于中华鳖基因组选择育种和性别决定分子机制的研究也将起到 促进作用。 发明内容 [0005]1.要解决的技 术问题 [0006]本发明的目的是为了解决现有技术中在性腺发育成熟之前， 其性别通过肉眼更难 判别， 胚胎和幼体阶段雌雄鱼形态上几乎没有区别的问题， 而提出 的一种中华鳖遗传性别 相关的SNPs标记及其引物和应用。 [0007]2.技术方案 [0008]为了实现上述目的， 本发明采用了如下技 术方案： [0009]一种中华鳖遗传性别相关的SNPs标记， 所述SNPs标记为SEQ  ID NO:1 所示序列自 5’端起第164、 167、 172、 173、 174、 17 7位碱基为A/G、 C /T、 T/C、 T/C、 G/A、 C/T。 [0010]优选地， 所述SNPs标记为AG、 CT、 TC、 TC、 GA、 CT基因型的个体为雌性中华鳖， SNPs标 记为AA、 CC、 TT、 TT、 GG、 CC基因型的个 体为雄性中华鳖。 [0011]优选地， 所述引物组的核苷酸序列如SEQ  ID NO:2‑4所示。 [0012]本发明还提出了一种中华鳖遗传性别相关的S NPs标记的引物组， 包含核苷酸序列 如SEQ ID NO:2‑4所示的引物组。说　明　书 1/4 页 3 CN 114990233 A 3