(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211164926.5 (22)申请日 2022.09.23 (71)申请人 中国农业科 学院北京畜牧兽医研究 所 地址 100000 北京市海淀区 圆明园西路2号 (72)发明人 孙研研　陈继兰　袁经纬　亚当　 李云雷　麻慧　倪爱心　石雷　 (74)专利代理 机构 苏州言思嘉信专利代理事务 所(普通合伙) 32385 专利代理师 普冰清 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12N 15/113(2010.01) (54)发明名称 一种与鸡产蛋数和连产性状杂种优势相关 的miRNA及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种与鸡产蛋数和连产性状 杂种优势相关的miRNA及其应用。 本发明的有益 效果是， 本发 明通过高通量测序技术检测具有杂 种优势群体的卵巢组织miRNA表达谱， 筛选到与 鸡产蛋数和连产性状杂种优势显著相关的 miRNA， 其可作为产蛋数和连产性状杂种优势 的 分子标志物， 应用于鸡产蛋数和连产性状杂种优 势育种， 提高 蛋鸡生产性能。 权利要求书1页 说明书6页 附图1页 CN 115323066 A 2022.11.11 CN 115323066 A 1.一种与鸡产蛋数和连产性状杂种优势相关的miRNA， 其特征在于， 其核苷酸序列为 SEQ ID No.1： 5'‑UACCCUGUAGAACCGAAUUUGU‑3'。 2.根据权利要求1所述的一种与鸡产蛋数和连产性状杂种优势相关的miRNA作为分子 标志物在预测鸡 产蛋数和连产性状杂种优势中的应用。 3.一种如权利要求2所述的预测鸡产蛋数和连产性状杂种优势的构建方法， 其特征在 于， 包括如下步骤： (1)提取待检测鸡卵巢组织样本的总RNA； (2)使用miScript  II RT kit进行miRNA反转录； (3)采用目的miRNA特异性扩增上游引物及适用于加尾法的荧光定量PCR试剂盒进行所 述miRNA的扩增； 扩增后利用2‑Δ ΔCt法进行定量结果的分析； (4)将检测的杂交群体的miRNA的表达水平结果与亲本卵巢组织的miRNA的表达水平均 值进行比较， 分析表达模式， 预测杂种优势。 4.根据权利要求3所述的预测鸡产蛋数和连产性状杂种优势的构建方法， 其特征在于， 所述待检测鸡为洛岛红鸡和白来 航鸡。 5.一种预测鸡产蛋数和连产性状杂种优势的荧光定量PCR试剂盒， 其特征在于,包括： RNA反转录试剂、 目的miRNA的特异性扩增正向引物、 内参基因U6的特异性扩增正向引物、 miRNA荧光定量PCR通用反向引物、 荧 光定量PCR反应液。 6.根据权利要求5所述的预测鸡产蛋数和连产性状杂种优势的荧光定量PCR试剂 盒， 其 特征在于， 所述目的miRNA的特异性扩增正向引物序列为SEQ  ID No .2， 其序列为： 5 ' ‑ CGCGTACCCTGTAGAACCGA‑3'； 所述内参基因U6的特异性扩增正向引物序列为SEQ  ID No.3， 其序列为： 5 ' ‑ GTGACCCACGATGTGTAT TCGC‑3'； 所述miRNA荧光定量PCR通用反向引物序列为SEQ  ID No .4， 其序列为： 5 ' ‑ CAGTGCGTGTCGTG GAGT‑3'。 7.根据权利要求5或6所述的预测鸡产蛋数和连产性状杂种优势的荧光定量PCR试剂 盒 在预测洛岛红鸡和白来 航鸡产蛋数和连产性状杂种优势中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115323066 A 2一种与鸡产蛋数和连产性状杂种优势相关的miRNA及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及分子标记技术领域， 具体涉及 一种与鸡产蛋数和连产性状杂种优势相 关的miRNA及其应用。 背景技术 [0002]杂种优势是指两个遗传结构不同的群体杂交后 代在生活力、 繁殖力以及适应力等 方面优于亲本平均值的现象； 杂种优势被广泛用于提高农业动植物的产量、 增强其抗逆性 和适应性， 对提高农业生产的效率起到了重要作用； 但是杂种优势利用并不是只要杂交就 可取得满意效果， 同一性状在不同的亲本组合间表现出较大 的杂种优势差异； 在畜禽实际 育种中往往需要在不同纯系亲本群体之 间开展杂交试验， 根据杂交后代生产性能的测定结 果， 筛选目标性状杂种优势大的亲本组合， 但杂交试验耗时耗力成本高， 通常只能在 有限数 量的纯系间开展， 限制 了杂种优势的开发利用； 近年来 随着高通量测序技术和分子生物学 的发展， 为解析杂种优势遗传机理和复杂性状杂种优势预测提供了更为先进的技术手段； 鸡产蛋数和连产性状等是受多因素调控的复杂性状， 是蛋鸡最主要的生产性能指标； 蛋鸡 育种实践中需要对产蛋数和连产性状的杂种优势进行测定或预测； 但是目前尚缺乏有效的 分子标记； 根据杂种优势形成机制经典假说， 基因或相关调控元件的非加 性表达是杂种优 势形成的一种重要原因； 非加 性表达模式包括高亲表达(杂交后代的表达量高于双亲表达 量的平均值)、 低亲表达(杂交后代的表达量低于双亲表达量的平均值)、 超高亲表达(杂交 后代的表达量高于亲本中较高一方的表达量)、 超低亲表达(杂交后代的表达量低于亲本中 较低一方的表达量)； 挖掘非加 性表达的基因或调控元件作为分子标记成为杂种优势预测 和育种利用的重要途径； [0003]miRNA是一种非编码RNA， 长度在22nt左右， 在细胞分化和增殖等过程中发挥重要 的调节作用； 前期研究表明miRNA在生殖系统中大量表达， 是畜禽繁殖功能的调节器， 与复 杂性状的调控紧密相关， 因此 是潜在的分子标记 物。 发明内容 [0004]本发明的目的是为了解决上述问题， 设计了一种与鸡产蛋数和连产性状杂种优势 相关的miRNA及其应用。 [0005]实现上述目的本发明的技术方案为， 本发明首先提供了一种与鸡产蛋数和连产性 状杂种优势相关的miRNA， 其核苷酸序列为SEQ  ID No.1： 5'‑UACCCUGUAGAACCGAAUUUGU‑3'。 [0006]作为一种优选地具体方式， 一种与鸡产蛋数和连产性状杂种优势相关的miRNA作 为分子标志 物在预测鸡 产蛋数和连产性状杂种优势中的应用。 [0007]作为一种优选地具体方式， 一种预测鸡产 蛋数和连产性状杂种优势的构建方法， 包括如下步骤： [0008](1)提取待检测鸡卵巢组织样本的总RNA； [0009](2)使用miScript  II RT kit进行miRNA反转录；说　明　书 1/6 页 3 CN 115323066 A 3