(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210654294.4 (22)申请日 2022.06.10 (71)申请人 吉林省农业科 学院 地址 130000 吉林省长 春市生态大街13 63 号 (72)发明人 肖成　刘宇　曹阳　柳俭强　 苑志宇　张立春　马惠海　 (74)专利代理 机构 西安通大专利代理有限责任 公司 6120 0 专利代理师 范巍 (51)Int.Cl. C12Q 1/6858(2018.01) C12Q 1/6888(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种与绵羊肉质嫩度相关的基因多态位点 的检测方法及应用 (57)摘要 本发明公开了一种与绵羊肉质嫩度相关的 基因多态 位点的检测方法及应用。 通过测序技术 分析绵羊CCN5基因在群体中的遗传多态性， 并通 过与个体肉质性状数据相结合进行相关分析， 发 现可以依据CCN5基因第5外显子 上的多态位点对 肉质嫩度优势 绵羊群体进行早期选择。 权利要求书1页 说明书5页 序列表1页 附图2页 CN 115011676 A 2022.09.06 CN 115011676 A 1.一种绵羊C CN5基因单核苷酸多态性的检测方法， 其特 征在于： 包括以下步骤： 以绵羊基因组DNA或绵羊离体生物材料所含DNA为模板， 通过PCR扩增CCN5基因部分片 段， 利用该片段鉴定 CCN5基因第5 外显子单核苷酸多态性 位点的基因型。 2.根据权利要求1所述一种绵羊CCN5基因单核苷酸多态性的检测方法， 其特征在于： 所 述单核苷酸多态性 位点位于chr.13:762525 3， 该位点在绵羊群 体中存在C ‑G突变。 3.根据权利要求1所述一种绵羊CCN5基因单核苷酸多态性的检测方法， 其特征在于： 所 述PCR的引物为： 上游引物： 5 ’ ‑AACGGAGGGAAGGACATCAAAT‑3’ 下游引物： 5 ’ ‑AGCGGCTGACATAGAGT TTCCA‑3’。 4.根据权利要求1所述一种绵羊CCN5基因单核苷酸多态性的检测方法， 其特征在于： 所 述绵羊离体生物材 料为采集自绵羊个 体的血液。 5.根据权利要求1所述一种绵羊CCN5基因单核苷酸多态性的检测方法， 其特征在于： 所 述PCR的反应体系包括： 50～150ng/ μL绵羊基因组DNA  1～2 μL或绵羊血样1～2 μL， 以及10～ 20 μmol/L上、 下游引物各0.4～0.5 μL； 所述PCR的反应条件包括： 94℃5min； 94～9 5℃30s， 55 ～65℃30s， 72℃16s， 共3 5个循环； 72℃8mi n。 6.根据权利要求1所述一种绵羊CCN5基因单核苷酸多态性的检测方法， 其特征在于： 所 述基因型 的鉴定具体包括以下步骤： 对所述片段进行测序， 然后将测序结果与参考序列比 对。 7.一种绵羊CCN5基因单核苷酸多态性的检测试剂盒， 其特征在于： 该试剂盒包括用于 通过PCR‑测序法鉴定 CCN5基因第5 外显子单核苷酸多态性 位点的基因型的位 点扩增引物。 8.如权利要求1所述的绵羊CCN5基因单核苷酸多态性的检测方法在绵羊分子标记辅助 选择育种中的应用。 9.根据权利要求8所述的应用， 其特征在于： 所述单核苷酸多态性位点位于chr.13: 7625253， 该位点的基因型为CG或C C的个体在肉质性状上较优。 10.根据权利要求9所述的应用， 其特 征在于： 所述肉质性状选自肌内脂肪含量。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115011676 A 2一种与绵羊肉质嫩度相关的基因多态位点的检测方 法及应用 技术领域 [0001]本发明属于基 因检测及畜禽品种改良与育种领域， 具体涉及一种绵羊肉质嫩度相 关单核苷酸多态性(SNP)标记的鉴定 。 背景技术 [0002]随着经济进步， 居民生活水平不断提高， 餐饮业的蓬勃发展， 羊肉越来越受大众的 欢迎。 羊肉需求量增加的同时， 人们对其 肉质的要求也随之升高。 近年来， 育种工作者们 逐 渐将研究方向转移至绵羊肉质方面性状的改善。 羊肉整体品质由多种因素综合影响， 如肌 内脂肪含量能够显著影响肉质的嫩度； 羊肉中不饱和脂肪酸不仅会影响羊肉的风味而且还 是人体所必需的营养物质。 通过探知影响绵羊肉质性状的候选基因及其上发生突变的位点 与绵羊群体肉质性状差异的关联性， 为绵羊提高肉质质量的分子育种工作提供了重要依 据。 早期研究揭示了与小尾寒羊前体脂肪细胞分化过程相关基因表达规律(DOI:10.16431/ j.cnki.1671‑7236.2019.07.018.)， 但尚未确定影响肉质性状的主 要基因。 [0003]细胞间网络通信因子5(cellular  communication  network factor 5,CCN5)参与 机体多项生理过程， 如细胞粘附、 增殖、 分化、 迁移、 成熟等。 有研究表明， CCN5基因能够影响 间充质干细胞(MSCs)增殖和分化， 并参与机体的脂肪代谢。 但关于CCN5基因在家畜 肉质方 面的研究较少， 影响机体肉质性状的调控作用仍不明确 。 目前， 对于CCN5基因SNP标记的探 索处于停滞状态。 发明内容 [0004]本发明的目的在于提供一种与绵羊肉质嫩度相关的基因多态位点的检测方法及 应用， 为在固定群体里选择肌内脂肪含量相对较高的绵羊个体提供一种 快速有效的方法， 为提高绵羊肉质品质的育种提供依据。 [0005]为达到上述目的， 本发明采用了以下技 术方案： [0006]一种绵羊C CN5基因单核苷酸多态性的检测方法， 包括以下步骤： [0007]以绵羊基因组DNA或绵羊离体生物材料所含DNA为模板， 通过PCR扩增CCN5基因部 分片段， 利用该片段鉴定 CCN5基因第5 外显子单核苷酸多态性 位点的基因型。 [0008]优选的， 所述单核苷酸多态性位点位于chr.13:7625253， 该位点在绵羊(例如小尾 寒羊)群体中存在C ‑G突变。 [0009]优选的， 所述PCR的引物为： [0010]上游引物： 5 ’ ‑AACGGAGGGAAGGACATCAAAT‑3’(即SEQ.ID.NO.1) [0011]下游引物： 5 ’ ‑AGCGGCTGACATAGAGT TTCCA‑3’(即SEQ.ID.NO.2)。 [0012]优选的， 所述绵羊离体生物材 料为采集自绵羊个 体的血液。 [0013]优选的， 所述PCR的反应体系包括： 50～150ng/ μL绵羊基因组DNA  1～2 μL或绵羊血 样1～2 μL， 以及10～ 20 μmol/L上、 下游引物各0.4～0.5 μL。 [0014]优选的， 所述PCR的反应条件包括： 94℃5min； 94～95℃30s， 55～65℃30s， 72℃说　明　书 1/5 页 3 CN 115011676 A 3