(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 20221072180 6.4 (22)申请日 2022.06.24 (71)申请人 青岛欣科生物科技有限公司 地址 266200 山东省青岛市 即墨市三里庄 村北、 烟青一级路以西 (72)发明人 刘崇思　 (74)专利代理 机构 福州元创专利商标代理有限 公司 35100 专利代理师 林文弘　蔡学俊 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种CYP2 C19基因多态性的检测试剂盒及检 测方法 (57)摘要 本发明公开了一种CYP2C19 基因多态 性的检 测试剂盒及检测方法。 所述试剂盒含有检测用引 物和检测用探针， 所述检测用引物和检测用探针 包括： CYP2C19*2引物及CYP2C19*2探针， CYP2C19*3引物及CYP 2C19*3探针， CYP2C19*17引 物及CYP2C19*17探针。 所述试剂盒具有快速， 无 污染， 检测简便等优点， 适用于CYP2C19*2*3*17 单个核苷 酸突变位点检测， 可应用于患者氯吡格 雷临床用药指导。 权利要求书2页 说明书5页 序列表3页 附图3页 CN 114959016 A 2022.08.30 CN 114959016 A 1.一种CYP2C19基因多态性检测试剂盒， 其特征在于： 所述试剂盒含有检测用引物和检 测用探针， 所述检测用引物和检测用探针包括： CYP2C19*2引物及CYP2C19 *2探针， CYP2C19* 3引物及CYP2C19*3探针， CYP2C19*17引物及CYP2C19*17探针； 所述检测用引物以及检测用 荧光探针的核苷酸序列如下： CYP2C19*2引物： *2F： 5’ ‑CTGTGATC CCACTTTCATCCT‑3’， *2R： 5’ ‑TGTAAGTGGTTTCTCAGGAAGC‑3’； CYP2C19*2探针： *2Wtp： 5’ ‑FAM‑TTACCTGGATCCAGGGGGTGCTTA‑BHQ1‑3’， *2Mup： 5’ ‑HEX‑TTACCTGGATTCAGGGGGTGCTTACTT‑BHQ1‑3’； CYP2C19*3引物： *3F： 5’ ‑AGCTTGGCATATTGTATCTATAC C‑3’， *3R： 5’ ‑TCACTTTCCATAAAAGCAAGG‑3’； CYP2C19*3探针： *3Wtp： 5’ ‑FAM‑TTATGGGTTCCCGGGAAATAATCA‑  BHQ1‑3’， *3Mup： 5’ ‑HEX‑TTGTTATGGGTTCCTGGGAAATAATCA‑BHQ1‑3’； CYP2C19*17引物： *17F： 5’ ‑TGAACAGGATGAATGTGG‑3’， *17R： 5’ ‑TCTTCTGATGC CCATCGT‑3’； CYP2C19*17探针： *17Wtp： 5’ ‑FAM‑ACATCAGAGATGCT TTGAGAACAGAAGACAC‑BHQ1‑3’， *17Mup： 5’ ‑HEX‑TCTCTTACATCAGAGATACT TTGAGAACAGAAGACA‑BHQ1‑3’。 2.根据权利要求1所述的一种CYP2C19基因多态性检测试剂盒， 其特征在于： 所述试剂 盒还包括荧光定量PCR反应试剂， 所述荧光定量PCR反应试剂 包括2×PCR Premix和无RNase 去离子水。 3.根据权利要求1所述的一种CYP2C19基因多态性检测试剂盒， 其特征在于： 所述试剂 盒还包括阳性对照品和阴性对照品， 其中， 阴性对照品为双蒸水， 阳性对照品为携带 CYP2C19*2位点突变纯合型基因片段的质粒载体、 携带CYP2C19*2位点野生纯合型基因片段 的质粒载体、 携带CYP2C19*2位点杂 合型基因片段的质粒载体、 携带CYP2C19*3位点突变纯 合型基因片段的质粒载体、 携带CYP2C19*3位点野生纯合型基因片段的质粒载体、 携带 CYP2C19*3位点杂 合型基因片段的质粒载体、 携带CYP2C19*17位点突变纯合型基因片段的 质粒载体、 携带CYP2C19*17位点野生纯合型基因片段的质粒载体、 携带CYP2C19*17位点杂 合型基因片段的质粒 载体的混合物。 4.一种非诊断目的的检测CYP2C19基因多态性的方法， 其特征在于： 所述方法为利用权 利要求1所述的CYP2C19基因多态性检测试剂盒检测CYP2C19基因CYP2C19*2多态性、 CYP2C19*3多态性和C YP2C19*17多态性。 5.根据权利 要求4所述的一种非诊断目的的检测CYP2C19基因多态性的方法， 其特征在权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114959016 A 2于： 所述方法包括以下步骤： （1） 提取待检样品基因 组DNA， 作为DNA模板； （2） 将CYP2C19*2引物及CYP2C19*2探针和 荧光定量PCR反应试剂混合在一起， 加入DNA 模板， 对CYP2C19基因CYP2C19*2多态性进行荧光定量PCR扩增； 将CYP2C19*32引物及 CYP2C19*3探针和荧光定量PCR反应试剂混合在一起， 加入DNA模板， 对CYP2C19基因 CYP2C19*3多态性进行荧光定量PCR扩增； 将CYP2 C19*17引物及CYP2C19*17探针和荧光定量 PCR反应试剂混合在一起， 加入DNA模板， 对CYP2C19基因CYP2C19*17多态性进行荧光定量 PCR扩增； （3） 反应结束后， 进行数据收集处理和分析， 确定CYP2C19*2位点、 CYP2C19*3位点和 CYP2C19*17位 点的基因。 6.根据权利 要求5所述的一种非诊断目的的检测CYP2C19基因多态性的方法， 其特征在 于： 所述荧光定量PCR的反应体系为： 2x  PCR反应Mix  10 μL， 10 μM上下游 检测用引物0.4 μL， 5 μM上下游检测用探针0.2 μL， 7 μL无RNase去离 子水， 2.0 μLDNA模板 。 7.根据权利 要求5所述的一种非诊断目的的检测CYP2C19基因多态性的方法， 其特征在 于： 所述荧光定量PCR 的反应条件为： 95℃5分钟预变性； 45个循环： 94℃15秒， 60℃30秒， 收 集荧光。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114959016 A 3