(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210748449.0 (22)申请日 2022.06.29 (71)申请人 宁波海尔施基因科技股份有限公司 地址 315042 浙江省宁波市科技园区明珠 路396号 (72)发明人 余丁　严珂尔　金海英　周喆　 郑冰洁　吴哲琰　傅超英　 (74)专利代理 机构 宁波市鄞州盛飞专利代理事 务所(特殊普通 合伙) 33243 专利代理师 洪珊珊 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12Q 1/6858(2018.01) (54)发明名称 一种32个短串联重复序列 的荧光复合扩增 体系及其应用 (57)摘要 本发明属于生物基因检测技术领域， 涉及一 种32个短串联重复序列的荧光复合扩增体系及 其应用。 本发明荧光复合扩增体系包含了30个常 染色体基因座， 一个性别识别以及一个辅助性别 判断的Y染色体的Yindel。 19个A类基因座、 10个B 类基因座加1个C类基因座的组合能够提供更多 的遗传信息， 从而提高个体的识别 能力。 本发明 试剂盒不仅能够扩增常规各类提取样本， 而且对 新鲜和陈旧的血斑或唾液斑都可进行直接扩增， 能够使用DNA 检验技术来确认被拐卖妇女儿童身 份， 同时也适用于法医遗传学亲权鉴定及个体识 别。 权利要求书2页 说明书10页 序列表11页 附图3页 CN 115029450 A 2022.09.09 CN 115029450 A 1.一种32个短串联重复序列的荧光复合扩增体系， 其特征在于， 包括32对扩增引物， 分 别用于同时扩增30个常染色体STR位点， 1个C类基因座D4S2366， 1个Y ‑Indel位点； 所述30个 常染色体STR位点分别为： Amelogenin、 D18S51、 D21S11、 D3S1358、 FGA、 D8S1179、 vWA、 CSF1PO、 D16S539、 D 7S820、 D13S317、 D5S818、 D2S1338、 D19S433、 TH01、 TPOX、 D6S1043、 Penta   D、 Penta E、 D12S391、 D1S1656、 D2S441、 D22S1045、 D10S1248、 D8S1132、 D15S659、 D3S3045、 D19S253、 D6S477、 D10S143 5。 2.根据权利要求1所述的一种32个短串联重复序列的荧光复合扩增体系， 其特征在于， 32对扩增引物包括如下 所示的序列： D3S1358上下游引物序列如SEQ  ID NO.1、 SEQ ID NO.2所示； TH01上下游引物序列如SEQ  ID NO.3、 SEQ ID NO.4所示； D21S11上下游引物序列如SEQ  ID NO.5、 SEQ ID NO.6所示； D18S51上下游引物序列如SEQ  ID NO.7、 SEQ ID NO.8所示； Penta E上下游引物序列如SEQ  ID NO.9、 SEQ ID NO.10所示； Y‑indel上下游引物序列如SEQ  ID NO.11、 SEQ ID NO.12所示； D19S253上下游引物序列如SEQ  ID NO.13、 SEQ  ID NO.14所示； D12S391上 下游引物序列如SEQ  ID NO.15、 SEQ  ID NO.16所示； D6S1043上 下游引物序列如SEQ  ID NO.17、 SEQ  ID NO.18所示； D2S1338上下游引物序列如SEQ  ID NO.19、 SEQ  ID NO.20所示； D15S659上下游引物序列如SEQ  ID NO.21、 SEQ  ID NO.22所示； D6S477上下游引物序列如SEQ  ID NO.23、 SEQ  ID NO.24所示； Amelogenin上下游引物序列如SEQ  ID NO.25、 SEQ  ID NO.26所示； D5S818上下游引物序列如SEQ  ID NO.27、 SEQ  ID NO.28所示； D13S317上下游引物序列如SEQ  ID NO.29、 SEQ ID NO.30所示； D7S820引物对序列为上 下游引物序列如SEQ  ID NO.31、 SEQ  ID NO.32所示； D19S433上下游引物序列如SEQ  ID NO.33、 SEQ ID NO.34所示； CSF1PO上 下游引物序列如SEQ  ID NO.35、 SEQ ID NO.36所示； Penta D上下游引物序列如SEQ  ID NO.37、 SEQ  ID NO.38所示； D2S441上下游引物序列如SEQ  ID NO.39、 SEQ  ID NO.40所示； VWA上下游引物序列如SEQ  ID NO.41、 SEQ  ID NO.42所示； D8S1179上下游引物序列如SEQ  ID NO.43、 SEQ  ID NO.44所示； TPOX上下游引物序列如SEQ  ID NO.45、 SEQ  ID NO.46所示； FGA上下游引物序列如SEQ  ID NO.47、 SEQ  ID NO.48所示； D4S2366上下游引物序列如SEQ  ID NO.49、 SEQ  ID NO.50所示； D3S3045上下游引物序列如SEQ  ID NO.51、 SEQ  ID NO.52所示； D16S539上下游引物序列如SEQ  ID NO.53、 SEQ ID NO.54所示； D22S1045上 下游引物序列如SEQ  ID NO.55、 SEQ ID NO.56所示； D8S1132上下游引物序列如SEQ  ID NO.57、 SEQ  ID NO.58所示； D1S1656上下游引物序列如SEQ  ID NO.59、 SEQ  ID NO.60所示； D10S1248上 下游引物序列如SEQ  ID NO.61、 SEQ  ID NO.62所示；权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115029450 A 2D10S1435上下游引物序列如SEQ  ID NO.63、 SEQ ID NO.64所示。 3.根据权利要求1所述的一种32个短串联重复序列的荧光复合扩增体系， 其特征在于， 所述荧光复合扩增 体系中的32对引物的5 ’端分别由5种不同的荧光素进行标记， 相同的荧 光素标记视为同一组， 五组 组合分别为： 第一组D3S13 58、 TH01、 D21S1 1、 D18S51和Penta  E； 第二组Y‑indel、 D19S25 3、 D12S391、 D6S1043、 D2S13 38、 D15S6 59和D6S47 7； 第三组Amel ogenin、 D5S818、 D13S317、 D7S 820、 D19S43 3、 CSF1PO和Penta  D； 第四组D2S4 41、 VWA、 D 8S1179、 TPOX、 FGA和D4S23 66； 第五组D3S3 045、 D16S5 39、 D22S1045、 D 8S1132、 D1S16 56、 D10S1248和D10S143 5。 4.根据权利要求3所述的一种32个短串联重复序列的荧光复合扩增体系， 其特征在于， 荧光素为FAM、 H EX、 TAMRA、 ROX和AF549中的至少一种。 5.根据权利要求1所述的一种32个短串联重复序列的荧光复合扩增体系， 其特征在于， 还包括一组荧光分子量内标SIZE ‑500， 所述分子量内标的片段大小： 75、 87、 100、 125、 150、 175、 200、 225、 250、 275、 300、 325、 350、 375、 40 0、 425、 45 0、 475和5 00。 6.根据权利要求5所述的一种32个短串联重复序列的荧光复合扩增体系， 其特征在于， 分子量内标的荧 光素标记采用AF6 33染料。 7.根据权利要求1所述的一种32个短串联重复序列的荧光复合扩增体系， 其特征在于， 还包括等位基因分型 标准物Allelic Ladder。 8.一种试剂盒， 其特 征在于， 包括权利要求1 ‑7所述的荧 光复合扩增体系。 9.一种如权利要求8所述试剂盒的使用方法， 所述方法包括如下步骤： S1、 利用Chelex法、 磁珠提取法和硅珠提取法提取的人基因组DNA， 或采用免提取的血 斑采集卡和口腔细胞采集 卡来获得扩增模版； S2、 对获取的DNA进行扩增； S3、 将试剂盒中的分子量内标和去离子甲酰胺混合配制成上样混合物， 再将上样混合 物和扩增产物或试剂盒中的32个基因座的等位基因分型标准物通过遗传分析仪进行电泳 检测； S4、 对结果进行分析。 10.权利要求1 ‑7所述的荧光复合扩增体系， 或权利要求9所述的试剂 盒在拐卖/失踪儿 童信息系统中的应用。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115029450 A 3