(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210673582.4 (22)申请日 2022.06.14 (83)生物保 藏信息 GDMCC No： 61165 2020.08.24 (71)申请人 广东省科 学院微生物研究所 （广东 省微生物分析检测中心） 地址 510070 广东省广州市先烈中路10 0号 大院56号 (72)发明人 吴清平　胡惠萍　吴晓贤　刘远超　 蔡曼君　梁晓薇　卓丽君　李向敏　 杜娜　王傲　谢意珍　张智　 (74)专利代理 机构 广州科粤专利商标代理有限 公司 44001 专利代理师 朱聪聪　刘明星(51)Int.Cl. C12N 1/14(2006.01) C12Q 1/6895(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12R 1/645(2006.01) (54)发明名称 一株高产多糖灰树花新菌株W151021及其分 子标记 (57)摘要 本发明公开了一株高产多糖灰树花新菌株 W151021及其 分子标记， 属于食药用菌技术领域。 本发明提供一株 灰树花(Grifolafrondosa)菌株 HMGIM‑W151021， 其保藏编号为GDMCCNo： 61165。 本发明人将采集到的灰树花经过分离纯化获得 其纯菌株并且经过人工驯化栽培工艺研究得到 其人工栽培子实体， 获得高产多糖、 耐缺氧等具 有优良性状的灰树花品种， 利于工厂化栽培。 为 更好地保护该品种， 本发明还提供了HMGIM ‑ W151021的特异性引物， 从而使更好地保护该菌 株资源。 权利要求书1页 说明书11页 序列表2页 附图4页 CN 114921348 A 2022.08.19 CN 114921348 A 1.一株灰树花(Grifola  frondosa)菌株HMGIM ‑W151021， 其保藏编号为GDMCC  No： 61165。 2.权利要求1所述的灰树 花菌株HMGIM‑W151021在 如下(1)‑(5)至少一项中的应用： (1)制备多糖； (2)作为亲代培 育优良性状品种； (3)工厂化栽培； (4)制备灰树花子实体、 菌 丝体和/或孢子； (5)制备食品和/或药品。 3.根据权利要求2所述的应用， 其特征在于， 所述的优良性状包括高产多糖、 耐缺氧、 生 长周期短、 出菇数量高、 子实体朵型完整、 出菇整齐度高、 菌质脆嫩中的一种或多种。 4.一种权利要求1所述灰树花菌株HMGIM ‑W151021的栽培方法， 其特征在于， 包括以下 步骤： a.将所述灰树花菌株HMGIM ‑W151021的菌种或子实体接种到母种培养基上培养得到母 种菌丝； b.将所述母种菌 丝接种到原种培 养基中扩大培 养得到原种菌 丝； c.将所述原种菌 丝接种到栽培料培 养基中进行栽培和出菇管理。 5.根据权利要求4所述的栽培方法， 其特征在于， 所述母种培养基的成分及其质量分数 为： 马铃薯20％+葡萄糖2 ％+蛋白胨0.3％+酵母提取粉0.1％+琼脂2 ％+磷酸二氢钾0.3％+ 硫酸镁0.15％+维生素B1微量； 所述原种培养基的成分及其质量分数为： 38 ‑42％棉籽壳+ 35‑40％木屑+18 ‑20％麸皮+1 ‑2％碳酸钙； 所述栽培料培养基的成分及其质量分数为： 48 ‑ 52％木屑+28 ‑32％棉籽壳+18 ‑22％麸皮+1 ‑2％硫酸钙。 6.根据权利要求4所述的栽培方法， 其特征在于， 步骤c所述的菌袋栽培， 其栽培条件 为： 菌丝培养时， 置于22 ‑24℃恒温、 遮光培养， 其中湿度65 ‑75％， 二氧化碳浓度2500 ‑ 3000ppm， 培养温度不超过25℃； 待菌 丝成熟后， 置 于25℃遮光处， 继续培 养5‑7天。 7.根据权利要求4所述的栽培方法， 其特征在于， 步骤c所述的出菇管理， 包括原基诱 导、 原基分化开叶和 子实体采收， 其中， 所述原基诱导的条件为： 每天光照24小 时， 湿度80 ‑ 90％， 温度18 ‑20℃， 二氧化碳浓度小于3000ppm； 所述原 基分化开叶的条件为： 光照每天12 ‑ 20小时， 湿度 95‑98％， 温度18 ‑20℃， 二氧化碳浓度小于1000ppm； 所述子实体采收是在叶片 增厚即分化菌孔前及时采收。 8.一种灰树花菌株HMGIM ‑W151021的特异性InDel位点， 其特征在于， 所述InDel位点是 在灰树花染色体LUG G01000006.1第568442位碱基(T)处插 入碱基如下片段： TGTAGAGA ACAAGCCGGCGAGCAATCGAATAGGGCCCGATGCCCGCACGTA。 9.一种鉴定灰树花菌株HMGIM ‑W151021的特异性引物， 其特征在于， 所述的特异性引物 为： G3‑F： GGCGAGCAATCGAATAGGGC， G3‑R： TCTGTC CTTCGGCGTCCTCA。 10.一种灰树花菌株HMGIM ‑W151021的鉴定试剂盒， 其特征在于， 包括权利要求9所述的 特异性引物。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114921348 A 2一株高产多糖灰树花 新菌株W151021及其分子标记 技术领域： [0001]本发明属于食药用菌技术领域， 具体涉及一株高产多糖灰树花新菌株W151021及 其分子标记。 背景技术： [0002]灰树花(Grifola  frondosa)又称灰树花孔菌， 其子实体一年生， 具柄， 柄从基部分 枝形成许多 具侧生柄的菌盖， 覆瓦状叠生 或连生， 新鲜时 肉质， 干后软木质。 菌盖扇形、 贝壳 形至花瓣形， 外伸可达7cm， 宽可达8cm， 厚可达0.7cm； 表面灰白色至浅褐色， 光滑， 具不明显 放射状条纹， 无同心环带； 边缘与菌盖表面同色， 波状， 干后下卷。 表面白色至奶油色； 形状 不规则， 每毫米2 ‑3个； 孔口边缘薄， 撕裂状。 菌肉白色至奶油色， 厚可达4mm。 菌管与孔口表 面同色， 延生至菌柄上部， 长可达3mm。 菌柄多分枝， 奶油色， 长可达8cm， 直径可达1.5cm。 担 孢子5.2‑6.7×3.8‑4.2 μm， 卵圆形至椭圆形， 无色， 薄壁， 光滑， 非淀粉质， 不嗜蓝。 夏秋季生 于多种阔叶树基部， 尤其以蒙古栎上最为常见， 造成木材白色腐朽。 食 药兼用。 《中 国大型菌 物资源图鉴》 中记载 灰树花分布于东北和华北等 地区。 [0003]灰树花目前涉及到的功效主要是抗肿瘤、 降血糖、 调节免疫、 降压降脂、 护肤、 神经 元保护等， 在目前已经广泛研究 的食药用菌中， 其保健功能较为突出， 其多糖可抑制肿瘤细 胞增殖， 通过刺激免疫系统识别而产生抑制肿瘤的作用， 同时还具有显著的降血糖、 降血脂 等作用。 目前灰树花提取物是除了香菇多糖外获得国内药字号的为数不多的以药用菌提取 物制作的药品， 足见其功效卓著。 而以灰树花为主要原料 的降血糖食品也逐渐获得消费者 的认可， 市场份额 不断增加。 [0004]目前国内灰树花的菌种多来自于日本引进， 同时由于其生长特性， 难以适应低氧 浓度， 所以工厂化栽培技术一直难以推广。 因此需要筛选耐缺氧的灰树花菌株， 同时灰树花 多糖是其有效成分的主要来源， 筛选多糖含量较高的品种也是提升灰树花品质的重要手段 之一。 发明内容： [0005]为了克服上述问题， 本发明提供一株高产多糖灰树花新菌株W151021及其分子标 记。 本发明中从野生环境下采集到的灰树花经过分离纯化获得其纯菌株并且经过人工驯化 栽培工艺研究得到其人工栽培子实体， 找到高多糖含量的灰树花品种， 同时其耐缺氧的特 性较目前的市场主栽 品种更为优异， 较利于工厂化栽培。 为更好地保护该品种， 我们通过重 测序的方法获得其特异性的I nDel位点， 并通过设计和验证得到特异性引物。 [0006]本发明的第一个目的是提供一株灰树花(Grifola  frondosa)菌株HMGIM ‑ W151021， 其保藏编号为 GDMCC No： 61165。 所述的灰树花菌株HMGIM ‑W151021HMGIM ‑W151021 菌株的活力强， 在培养后 期， 料面的菌丝开始增多变成浓密， 料面变白， 容易形成原基， 以引 物ITS1/ITS4测序， 发现与灰树花Grifola  frondosa相似性为98.76％， 结合形态学鉴定， 该 真菌标本宏观特征和显微特征与Grifola  frondosa描述一致， 鉴定结果为Grifola  说　明　书 1/11 页 3 CN 114921348 A 3