(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210695848.5 (22)申请日 2022.06.20 (71)申请人 南京医科 大学 地址 211166 江苏省南京市江宁区龙眠大 道101号 (72)发明人 王海　苏川　戴俊程　刘巧玉　 陈晓军　马子健　 (74)专利代理 机构 南京天华专利代理有限责任 公司 32218 专利代理师 吴爽　徐冬涛 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01) C12Q 1/6888(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 miRNA在制备包虫病风险评估或早期筛查试 剂中的应用 (57)摘要 本发明属于医药领域， 具体涉及miRNA在制 备包虫病风险评估或早期筛查试剂中的应用。 本 发明的一种与包虫病风险评估或早期筛查相关 的血清miRNA标志物， 该血清miRNA标志物为hsa ‑ miR‑516a‑5p、 hsa‑miR‑516b‑5p、 hsa‑miR‑518e‑ 5p、 hsa‑miR‑519a‑5p、 hsa‑miR‑519b‑5p、 hsa‑ miR‑519c‑5p、 hsa‑miR‑522‑5p、 hsa‑miR‑523‑ 5p、 hsa‑miR‑6852‑5p、 hsa‑miR‑1304‑3p、 hsa‑ miR‑3138、 hsa ‑miR‑431‑5p、 hsa‑miR‑324‑3p、 hsa‑miR‑526b‑5p、 hsa‑miR‑5187‑5p中的一种或 多种。 本发明的miRNA作为新型的生物标志物， 稳 定定好， 灵敏度和特异性高。 权利要求书1页 说明书5页 附图3页 CN 114854848 A 2022.08.05 CN 114854848 A 1.一种与包虫病风险评估和/或早期筛查相关的血清miRNA标志物， 该血清miRNA标志 物为hsa‑miR‑516a‑5p、 hsa‑miR‑516b‑5p、 hsa‑miR‑518e‑5p、 hsa‑miR‑519a‑5p、 hsa‑miR‑ 519b‑5p、 hsa‑miR‑519c‑5p、 hsa‑miR‑522‑5p、 hsa‑miR‑523‑5p、 hsa‑miR‑6852‑5p、 hsa‑ miR‑1304‑3p、 hsa‑miR‑3138、 hsa ‑miR‑431‑5p、 hsa‑miR‑324‑3p、 hsa‑miR‑526b‑5p、 hsa‑ miR‑5187‑5p中的一种或多种。 2.根据权利要求1所述的一种与包虫病风险评估和/或早期筛查相关的血清miRNA标志 物， 其特征在于， 所述血清miRNA标志物为hsa ‑miR‑518e‑5p、 hsa‑miR‑519a‑5p、 hsa‑miR‑ 519b‑5p、 hsa‑miR‑519c‑5p、 hsa‑miR‑522‑5p、 hsa‑miR‑523‑5p、 hsa‑miR‑6852‑5p和hsa‑ miR‑1304‑3p中的两种或两种以上的组合。 3.根据权利要求1或2所述的一种与包虫病风险评估和/或早期筛查相 关的血清miRNA 标志物， 其特征在于， 所述血清miRNA标志物为hsa ‑miR‑518e‑5p、 hsa‑miR‑519a‑5p、 hsa‑ miR‑519b‑5p、 hsa‑miR‑519c‑5p、 hsa‑miR‑522‑5p、 hsa‑miR‑523‑5p、 hsa‑miR‑6852‑5p和 hsa‑miR‑1304‑3p八种miRNA所组成的组合。 4.权利要求1‑3任一所述的血清miRNA标志物在制备包虫病风险评估和/或早期筛查试 剂中的应用。 5.一种与包虫病风险评估和/或早期筛查相关的血清miRNA标志物的引物， 其特征在 于， 所述的血清miRNA标志物为hsa ‑miR‑516a‑5p、 hsa‑miR‑516b‑5p、 hsa‑miR‑518e‑5p、 hsa‑miR‑519a‑5p、 hsa‑miR‑519b‑5p、 hsa‑miR‑519c‑5p、 hsa‑miR‑522‑5p、 hsa‑miR‑523‑ 5p、 hsa‑miR‑6852‑5p、 hsa‑miR‑1304‑3p、 hsa‑miR‑3138、 hsa ‑miR‑431‑5p、 hsa‑miR‑324‑ 3p、 hsa‑miR‑526b‑5p、 hsa‑miR‑5187‑5p中的一种或多种。 6.权利要求5所述的引物在制备包虫病风险评估或早期筛查试剂中的应用。 7.一种包虫病风险评估或早期筛查试剂盒， 该 试剂盒用于检测血清miRNA标志 物。 8.根据权利要求7所述的一种包虫病风险评估和/或早期筛查试剂盒， 其特征在于， 该 试剂盒含有权利要求5 ‑6任一所述的血清miRNA标志 物的引物。 9.根据权利要求8所述的一种 包虫病风险评估和/或早期筛查试剂 盒， 该试剂 盒中还包 括PCR技术常用试剂。 10.检测血清miRNA标志物的引物在制备包虫病风险评估和/或早期筛查试剂 盒中的应 用， 其特征在于， 所述的血清miRNA标志物为hsa ‑miR‑516a‑5p、 hsa‑miR‑516b‑5p、 hsa‑miR‑ 518e‑5p、 hsa‑miR‑519a‑5p、 hsa‑miR‑519b‑5p、 hsa‑miR‑519c‑5p、 hsa‑miR‑522‑5p、 hsa‑ miR‑523‑5p、 hsa‑miR‑6852‑5p、 hsa‑miR‑1304‑3p、 hsa‑miR‑3138、 hsa ‑miR‑431‑5p、 hsa‑ miR‑324‑3p、 hsa‑miR‑526b‑5p、 hsa‑miR‑5187‑5p中的一种或多种。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114854848 A 2miRNA在制备包虫病风险评估或早期筛查试剂中的应用 技术领域 [0001]本发明属于医药领域， 具体涉及一种靶向包虫生长必须物质合成途径的miRNA在 制备包虫病风险评估或早期筛查试剂中的应用。 背景技术 [0002]细粒棘球蚴病， 即包虫病， 是由细粒棘球蚴感染人体引起的一种重要的人兽共患 寄生虫病。 细粒棘球蚴感染早期无明显症状， 患者通常是不会去医院就诊。 然而， 包虫病发 展至慢性期可表现为肝脏、 肺脏等重要脏器囊肿， 死亡率高达2％ ‑4％(McManus  DP,Zhang   W,Li J,Bartley  PB.Echinococcosis.Lancet.2003； 3629392:1295 ‑304； doi:10.1016/ S0140‑6736(03)14573 ‑4)。 如不及时采取有效治疗措施， 患者死亡率可显著增加(Craig   PS,McManus  DP,Lightowlers  MW,Chabalgoity  JA,Garcia  HH,Gavidia  CM,et  al.Prevention  and control of cystic echinococcosis.Lancet  Infect Dis.2007； 7   6:385‑94； doi:10.1016/S1473 ‑3099(07)70134‑2)。 因此， 对包虫病进行风险评估和早期筛 查， 有利于指导包虫病的诊断和治疗， 进 而减少包虫病患者死 亡。 [0003]临床上主要通过手术取出棘球蚴， 或从患者痰液、 胸膜积液、 腹水等检获棘球蚴囊 壁、 子囊、 原头蚴或小沟等进而确诊包虫病。 另外， 利用X线、 B超、 CT或MRI等影像学手段或 ELISA检测棘球蚴病相关的特异 性抗体或抗原 等免疫学手段也可辅助诊断包虫病。 但是， 目 前临床上和流行区仍缺乏有效的手段对流行区潜在感染者进行风险评估和早期筛查。 因 此， 研发包虫病风险评估的方法， 单独或与现有检测技术结合使用， 以提早治疗包虫病患 者， 以及控制和 消除包虫病均至关重要。 [0004]众所周知， 包虫自身缺乏从头合成其生长所必须的嘌呤、 嘧啶、 脂肪酸和大多数氨 基酸(尤其是甘氨酸)(Zheng  H,Zhang W,Zhang L,Zhang Z,Li J,Lu G,et al.The genome  of the hydatid tapeworm  Echinococcus  granulosus.Nat  Genet.2013； 45  10:1168‑75； Celik C,Amanvermez  R,Ozkan K.Free amino acid concentration  in hydatid cyst  fluids from fertile  and infertile  human and animal Echinococcus   granulosus.Parasite.2001； 8  4:343‑8)。 因此， 包虫感染宿主后， 必须利用宿主来源的包 虫生长必须物质(嘌呤、 嘧啶、 脂肪酸和甘氨酸等)来维持其生长并建立感染。 相反， 宿主为 了限制和抵抗包虫感染， 可通过多种途径调控这些包虫生长必须物质的合成途径。 [0005]微小RNA(mi RNA)是一类长度为18～25个核苷酸的非编 码RNA， 通过靶向mRNA  3′非 翻译区降解靶mRNA或抑制其翻译， 从而调控多种生物学功能(Bartel  DP.MicroRNAs: target recognition  and regulatory  fu