(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211381248.8 (22)申请日 2022.11.07 (71)申请人 百力格生物科技 （上海） 股份有限公 司 地址 201611 上海市松江区书 海路99号23 幢 (72)发明人 苏敏　王舒心　蔡晶晶　李俊　 (74)专利代理 机构 北京玄法律师事务所 16 002 专利代理师 潘满根 (51)Int.Cl. C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 MGB探针溶解方法及其溶 液 (57)摘要 本发明提供MGB探针溶解方法， 所述MGB探针 在实时荧光定量PCR反应中应用， 所述MGB探针包 含至少4个连续鸟嘌呤， 向所述MGB探针中加入1 ×TE缓冲液， 70℃ ‑80℃条件下加热振荡溶解， 然 后添加10% ‑30%体积比例甲酰胺或添加比例15% ‑ 30%体积比例乙酰胺。 本发明的方法可以使得含 有Poly(dG)MGB探针 溶解度提高， 避免了MGB探针 中Poly(dG)结构 对于溶解度的影响， 避免了 溶解 后探针的析出， 使其在QPCR过程中更加稳定 。 权利要求书1页 说明书14页 CN 115418395 A 2022.12.02 CN 115418395 A 1.MGB探针溶解方法， 其特征在于， 所述MGB探针在实时荧光定量PCR反应中应用， 所述 MGB探针包含至少4个连续鸟嘌呤， 向所述MGB探针中加入1 ×TE缓冲液， 70℃ ‑80℃条件 下加 热振荡溶解， 然后添加10% ‑30%体积比例甲酰胺或添加比例15% ‑30%体积比例乙酰胺。 2.根据权利要求1所述的MGB探针溶解方法， 其特征在于， 添加10% ‑15%体积比例甲酰 胺。 3.根据权利要求2所述的MGB探针溶解方法， 其特 征在于， 添加15%体积比例甲酰胺。 4.根据权利 要求1所述的MGB探针溶解方法， 其特征在于， 70℃ ‑80℃条件下加热振荡溶 解1‑3分钟。 5.根据权利要求4所述的MGB探针溶解方法， 其特征在于，  70℃条件下加热振荡溶解3 分钟。 6.根据权利 要求1‑5任一所述的MGB探针溶解方法， 其特征在于， 所述MGB探针的荧光基 团包括FAM、 VIC、 H EX、 ROX和C Y5。 7.根据权利要求1 ‑6任一所述的方法制备的MGB探针溶 液。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115418395 A 2MGB探针溶解方 法及其溶液 技术领域 [0001]本发明涉及分子生物学技 术领域， 特别涉及MGB探针溶解方法及其溶 液。 背景技术 [0002]MGB （minor  groove binding， 小沟结合淬灭剂） 核酸探针， 一般指的是核酸探针的 3’端标记小沟结合剂 （minor  groove binder） 的单链核酸。 小沟结合剂具有大的共轭结构 以及小沟嵌合结构， 跟双链DNA有更好的结合力， 从而可以提高核酸探针的Tm值， 因此3 ’端 用MGB作为淬灭基团的荧光探针， 序列可以比常规Taqman探针 设计的更短， 从而更好的淬灭 5’端荧光修饰产生的荧光信号。 MGB探针具有荧光本底更低， 更高的灵敏度和特异性等特 点， 广泛应用于基因分析和基因表达等领域。 但是由于M GB的结构特征导致疏水性 强 （如式1 所示） ， 这类MGB探针在常规的溶解体系 （超纯 水/1×TE缓冲液） 中， 溶解度较差 。 [0003]式1 在设计实时荧光定量PCR反应所需的MGB探针时， 针对特定的检测位点， 有时会存 在探针序列中出现连续4个及以上鸟嘌 呤 （dG） 的情况， 通常将这类探针称为Poly(dG)MGB探 针。 鸟嘌呤 （dG） 是一个能够自我结合、 自我组装的核酸碱基， 探针序列中连续的4个鸟嘌呤 可通过氢键作用力形成一个相互连接的刚性结构 （式2所示） ， 具有这种 结构的探针溶解度 比较差， 再加上MGB类探针溶解性本身就较差， Poly(dG)MGB探针就更加难以溶解。 从而导致 后续QPCR测试 过程中荧 光信号值降低或荧 光不稳定的情况。 [0004]式2。说　明　书 1/14 页 3 CN 115418395 A 3