(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210582494.3 (22)申请日 2022.05.26 (71)申请人 华南农业大 学 地址 510642 广东省广州市天河区五山路 483号 (72)发明人 张哲　云冰　李加琪　吕媛媛　 周尹祺　曾李清　张豪　袁晓龙　 陈赞谋　 (74)专利代理 机构 广州市华学知识产权代理有 限公司 4 4245 专利代理师 张珍 (51)Int.Cl. C12N 15/113(2010.01) C12N 15/11(2006.01) C12N 15/85(2006.01)C12N 15/66(2006.01) C12N 5/10(2006.01) A61K 31/7088(2006.01) A61P 15/08(2006.01) (54)发明名称 LncRNA TAB2-AS及其在猪卵巢颗粒细胞中 的应用 (57)摘要 本发明公开了LncRNA  TAB2‑AS及其在猪卵 巢颗粒细胞中的应用。 本发明以lncRNA  TAB2‑AS 为研究对象， 通过DNA甲基转移酶抑制剂5 ‑Aza‑ CdR处理细胞， 检测DNA甲基化对其转录的影响； 通过核质分离实验和构建lncRNA的EGFP融合蛋 白载体检测其亚细胞定位及其编码能力； 通过构 建lncRNA的过表达 载体和合成其反义寡核苷酸， 检测其对猪卵巢颗粒细胞功能的影 响。 本发明验 证了DNA甲基化能抑制lncRNA  TAB2‑AS的转录； 阐明了其对猪卵巢颗粒细胞的影 响： 其能促进猪 卵巢颗粒细胞增殖， 抑制猪卵巢颗粒细胞凋亡。 这对于研究卵巢卵泡发育、 闭锁的机制具有很好 的应用价 值。 权利要求书2页 说明书8页 序列表3页 附图3页 CN 114934051 A 2022.08.23 CN 114934051 A 1.一种长链非编码RNA， 命名为lncRNA  TAB2‑AS， 其特征在于： 其核苷酸序列如SEQ  ID  NO： 1所示。 2.权利要求1中所述的长链非编码RNA相关的生物材料， 其特征在于： 为下述生物材料 中的任意 一种或多种组合： 1)编码所述长链非编码RNA的DNA分子； 2)含有1)中所述DNA分子的表达盒； 3)含有1)中所述DNA分子的重组载体， 或含有2)中所述表达盒的重组载体； 4)抑制所述长链非编码RNA 表达的反义寡核苷酸； 5)含有1)中所述DNA分子的重组细 胞， 或含有2)中所述表达盒的重组细胞， 或含有3)中 所述重组载体的重组细胞， 或含有4)中所述反义寡核苷酸的重组细胞。 3.根据权利要求2中所述的生物材 料， 其特征在于： 1)中所述DNA分子通过如下方式制备得到： 提取猪卵巢颗粒细胞的RNA， 将其逆转录成 cDNA， 以cDNA为模板进行PCR扩增， 得到目的片段。 4.根据权利要求3所述的生物材 料， 其特征在于： PCR扩增所用引物如下 所示： lncRNA TAB2‑AS Forward： 5 ′ ‑CGCGGATCCACTGCCCCAACAGTAAAGCA‑3′； lncRNA TAB2‑AS Reverse： 5 ′ ‑CCGCTCGAG GCCCTCATAAGTGCCGATGT‑3′； 其中， 黑色加粗字体部分为保护碱基， 下划线为酶切位 点。 5.根据权利要求2所述的生物材 料， 其特征在于： 3)中所述重组载体通过如下方式制备得到： 将所述DNA分子连接到用限制性内切酶 BamHI和Xho I酶切后的pcDNA3.1载体上， 得到 重组载体。 6.根据权利要求2所述的生物材 料， 其特征在于： 4)中所述反义寡核苷酸的序列为： ASO‑lncRNA TAB2‑AS‑2： 5′ ‑AAAGGGCTGTAGGTACTGCT ‑3′。 7.权利要求1中所述的长链非编码 RNA或权利要求2 ‑6任一项中所述的生物材料在猪卵 巢颗粒细胞中的应用， 其特征在于： 体外环境下， 所述的长链非编码RNA 正调控细胞增殖、 细 胞凋亡中的任意 一种或两种功能表型。 8.根据权利要求7 所述的应用， 其特 征在于： 增加外源性lncRNA  TAB2‑AS， 促进细胞增殖、 抑制细胞凋亡； 抑制lncRNA  TAB2‑AS表 达， 抑制细胞增殖、 促进细胞凋亡。 9.权利要求1中所述的长链非编码RNA在制备药物中的应用， 其特征在于： 所述的药物 为下述药物中的任意 一种或多种组合： Ⅰ.促进猪卵巢颗粒细胞增殖的药物； Ⅱ.抑制猪卵巢颗粒细胞凋亡的药物； Ⅲ.促进卵泡发育的药物。 10.权利要求2 ‑5任一项中所述的DNA分子或表达盒或重组载体在制备药物中的应用， 其特征在于： 所述的药物为下述药物中的任意 一种或多种组合： Ⅰ.促进猪卵巢颗粒细胞增殖的药物； Ⅱ.抑制猪卵巢颗粒细胞凋亡的药物；权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114934051 A 2Ⅲ.促进卵泡发育的药物。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114934051 A 3