(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210581233.X (22)申请日 2022.05.26 (71)申请人 中国海洋大学 地址 266075 山东省青岛市崂山区松岭路 238号 (72)发明人 李昀　温海深　齐鑫　王灵钰　 李金库　陈通　 (74)专利代理 机构 北京奇眸智达知识产权代理 有限公司 1 1861 专利代理师 吴小平 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12Q 1/6841(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 atp1b1b基因在海淡 水养殖花鲈鉴定中的应 用及应用方法 (57)摘要 本申请适用于生物检测技术领域， 提供了 atp1b1b基因在海淡 水养殖花鲈鉴定中的应用及 应用方法。 atp1b1b作为一种有效的海淡水养殖 花鲈鉴定的分子标志物， 其鳃组织表达水平与离 子转运密切相关； 本申请通过检测花鲈鳃组织中 atp1b1b基因的表达水平和表达位置， 可以快速 及准确地区分海淡水养殖的花鲈个 体。 权利要求书1页 说明书8页 序列表2页 附图2页 CN 114774561 A 2022.07.22 CN 114774561 A 1.atp1b1b基因作为分子标记 物在海淡水养殖花鲈鉴定中的应用。 2.根据权利要求1所述的atp1b1b基因作为分子标记物在海淡水养殖花鲈鉴定中的应 用， 其特征在于， 通过atp1b1b分子标记 物的检测进行海淡水养殖花鲈的鉴定 。 3.根据权利要求1所述的atp1b1b基因作为分子标记物在海淡水养殖花鲈鉴定中的应 用， 其特征在于， 通过荧光实时定量PCR和原位杂交技术检测花鲈鳃组织中atp1b1b的表达 水平和表达位置 。 4.用于鉴定海淡水养殖花鲈的PCR引物， 其特征在于， 所述PCR引物包括atp1b1b引物与 内参引物； 其中， 所述atp1b1b引物包括如SEQ  ID NO:1所示的正向引物和SEQ  ID NO:2所示的反向引 物； 所述内参引物为以18s为内参的引物， 核苷酸序列如SEQ  ID NO:3所示的正向引物和 SEQ ID NO:4所示的反向引物。 5.用于鉴定海淡水养殖花鲈的原位杂交探针合成特异性引物， 其特征在于， 所述原位 杂交探针合成特异性引物包括如SEQ  ID NO:5所示的正向引物和SEQ  ID NO:6所示的反向 引物。 6.atp1b1b基因作为分子标记物在海淡水养殖花鲈鉴定中的应用方法， 其特征在于， 包 括： 以花鲈鳃组织cDNA为模板， 分别用权利 要求4所述的atp1b1b引物与内参引物进行实时 荧光PCR扩增， 得到每个 反应管内的荧光信号到达 设定的域值时所经历的atp1b1b循环数与 内参循环数； 计算所述atp1b1b循环数与内参循环数的差值， 以通过所述差值的范围判断花鲈的养 殖环境； 利用权利要求5所述的原位杂交探针合成特异性引物检测atp1b1b基因在海淡水养殖 花鲈鳃组织中的阳性信号 位置， 以通过 所述阳性信号 位置判断花鲈的养殖环境。 7.根据权利要求6所述的atp1b1b基因作为分子标记物在海淡水养殖花鲈鉴定中的应 用方法， 其特 征在于， 淡水养殖花鲈鳃组织的差值范围在15.39 ～16.77之间； 海水养殖花鲈鳃组织的差值范围在17.85～ 20.26之间。 8.根据权利要求6所述的atp1b1b基因作为分子标记物在海淡水养殖花鲈鉴定中的应 用方法， 其特 征在于， atp1b1b基因在淡水养殖花鲈鳃 组织中的阳性信号位置主要位于鳃小片中部和底部上 皮， 相邻鳃小片之间的鳃丝上皮仅少量表达； atp1b1b基因在海水养殖花鲈鳃 组织中的阳性信号位置主要位于相邻鳃小片之间的鳃 丝上皮中。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114774561 A 2atp1b1b基因在海淡 水养殖花鲈鉴定中的应用及应用方 法 技术领域 [0001]本申请属于生物检测技术领域， 尤其涉及atp1b 1b基因在海淡水养殖花鲈鉴定中 的应用及应用方法。 背景技术 [0002]花鲈(Lateolabrax  maculatus)， 隶属鲈形目(Perciformes)、 鮨科(Serranida   e)、 花鲈属(Lateolabrax)， 俗称鲈鱼， 海鲈， 是我国重要的海产经济鱼类， 也是典型的广盐 性鱼类， 可以适应0～ 45‰的盐度范围。 然而， 研究表明， 淡水养殖的花鲈相对于海水腥味更 浓， 且香味更淡。 并且在EPA， DHA以及不饱和 脂肪酸等营养成分 的含量上， 海水养殖花鲈也 显著高于 淡水养殖花鲈。 [0003]故而， 对花鲈的海淡水养殖品种进行区分具有重要意义， 可以挑选出营养成分更 高， 更可口的花鲈。 但水产品在 脱离了生长环境后难以判断来源， 故迫切需要开发一种有效 且通用的方法来 鉴别花鲈的养殖环境。 发明内容 [0004]本申请实施例的目的在于提供atp1b1b基因作为分子标记物在海淡水养殖花鲈鉴 定中的应用， 旨在提供一种有效且通用的方法来 鉴别花鲈的养殖环境。 [0005]本申请实施例是这样实现的， atp1b1b基因作为分子标记物在海淡水养殖花鲈鉴 定中的应用。 [0006]本申请实施例的另一目的在 于用于鉴定海淡水养殖花鲈的PC R引物， 所述PCR引物 包括atp1b1b引物与内参引物； 其中， [0007]所述atp1b1b引物包括如S EQ ID NO： 1所示的正向引物和S EQ ID NO： 2所示的反向 引物； [0008]所述内参引物为以18s为内参的引物， 核苷酸序列如SEQ  ID NO： 3所示的正向引物 和SEQ ID NO： 4所示的反向引物。 [0009]本申请实施例的另一目的在于用于鉴定海淡水养殖花鲈的原位杂交探针合成特 异性引物， 所述原位杂交探针合成特异性引物包括如SEQ  ID NO： 5所示的正向引物和SEQ   ID NO： 6所示的反向引物。 [0010]本申请实施例的另一目的在 于atp1b1b基因作为分子标记物在海淡水养殖花鲈鉴 定中的应用方法， 包括： [0011]以花鲈鳃组织cDNA为模板， 分别用所述的atp1b1b引物与内参引物进行实时荧光 PCR扩增， 得到每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的atp1b1b循环数与内参 循环数； [0012]计算所述atp1b 1b循环数与内参循环数的差值， 以通过所述差值 的范围判断花鲈 的养殖环境； [0013]利用所述的原位杂交探针合成特异性引物检测atp1b1b基因在海淡水养殖花鲈鳃说　明　书 1/8 页 3 CN 114774561 A 3