(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210771795.0 (22)申请日 2022.06.30 (71)申请人 苏州睿明 医学检验实验室有限公司 地址 215000 江苏省苏州市工业园区桑田 街218号20楼401单 元 (72)发明人 惠薇　戴文韬　刘佳　丁国徽　 王泽群　 (74)专利代理 机构 苏州三英知识产权代理有限 公司 32412 专利代理师 朱如松 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 ATOH1基因检测的特异性引物和探针、 试剂 盒及其检测方法 (57)摘要 本发明公开了ATOH1基因检测的特异性引物 和探针、 试剂盒及其检测方法， 其中引物和探针， 为依据NCBI的mRNA序列， 设计ATOH1基因的引物 包括： 。 本发明通过针对性地优化检测方法， 特异性高， 敏感性强， 方法稳定好数值稳定， 进行相对定量， 准确度大 大提高， 结果可靠性强。 权利要求书2页 说明书9页 附图4页 CN 114959045 A 2022.08.30 CN 114959045 A 1.一种ATOH1基因检测的特异性引物和探针， 为依据NCBI的mRNA序列， 设计ATOH1基因 的引物包括： 序列(5'to3') ATOH1‑F AAGCCCCGCGGTTAAAGAT ATOH1‑R TCTGAAGCCAAGTCGTTGCTAA ATOH1‑P GTAAAAATAATTCTCCCCTACAGAT 。 2.如权利要求1所述的ATOH1基因检测的特异性引物和探针， 其特征在于， 还包括依据 NCBI的mRNA序列， 设计 配套的内参基因的引物包括： 序列(5'to3') 引物F CAAACAGGAACCCGAGGTTTT 引物R CAGCTTGGTAACACATGCTGTAT 引物P TGCATTTGGCCTTTCTGAGGCAGGGT 。 3.试剂盒， 包括如权利要求1或2所述的ATOH1基因检测的特异性引物和探针。 4.如权利要求3所述的试剂盒， 其特征在于， 还包括荧光组成， 所述荧光组成提供荧光 基团， 所述 荧光基团包括FAM、 H EX、 TET、 JOE、 C Y3或CY5中的任意 一种。 5.如权利要求3所述的试剂盒， 其特征在于， 还包括荧光淬灭组成， 所述荧光淬灭组成 提供荧光淬灭基团， 所述 荧光淬灭基团包括MGB、 BHQ1、 BHQ2或BHQ3中的任意 一种。 6.如权利要求3 ‑5任一所述的试剂盒， 其特征在于， 还包括反转录体系， 所述转录体系 包括： 组分 体积 反转录酶 2 μL 反转录引物 2 μL RNA 2 μL 反转录缓冲液 10 μL 无RNA酶超纯 水 4 μL 反应总体积 20 μL 。 7.如权利要求6所述的试剂盒， 其特征在于， 还包括PCR反应体系， 所述PCR反应体系包 括： 组分 体积 2X master mix 10 μL Primer F(10um) 1 μL Primer R(10um) 1 μL Probe(10um) 0.5 μL cDNA 1 μL 超纯水 6.5 μL 反应总体积 20 μL权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114959045 A 2。 8.适用于结直肠组织和肿瘤的ATOH1基因检测的检测方法， 包括： 准备样本， 提取样本RNA； 所述样本RNA反转录得到 cDNA， 并将得到的cDNA实施PCR扩增， 获得扩增样品； 检测所述扩增样品， 即获得依据ATOH1基因检测的特异性引物和探针的检测结果。 9.如权利要求8所述的适用于结直肠组织和肿瘤的ATOH1基因检测的检测方法， 其特征 在于， 所述反转录为在所述反转录体系中实施， 其 程序为： 步骤 温度 时间 1 25℃ 5min 2 50℃ 15min 3 85℃ 2min 4 4℃ ∞ 。 10.如权利要求8所述的适用于结直肠组织和肿瘤的ATOH1基因检测的检测方法， 其特 征在于， 所述实时荧 光定量PCR为在所述实时荧 光定量PCR反应 体系中实施， 其 程序为： 权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114959045 A 3