(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210752350.8 (22)申请日 2022.06.29 (71)申请人 斯贝福 （北京） 生物技 术有限公司 地址 100101 北京市延庆区八达岭经济开 发区西康路23号 (72)发明人 谢飞　王妍　张晓晴　陈红　 (74)专利代理 机构 北京同辉知识产权代理事务 所(普通合伙) 11357 专利代理师 孙艳敏 (51)Int.Cl. C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 ARMS-PCR法鉴定裸大鼠Fox n1突变基因型的 组合物及方法 (57)摘要 本发明公开了ARMS ‑PCR法鉴定裸大鼠Foxn1 突变基因型的组合物及方法， 基于裸大鼠Foxn1 基因外显子1429号碱基发生C到T的突变， 设计引 物组合物， 以待测Foxn1突变裸大鼠的基因组DNA 为模板， 按照ARMS ‑PCR法鉴定裸大鼠Foxn1突变 基因型的组合物进行PCR扩增， 得到PCR产物， 凝 胶电泳成像， 根据电泳结果中裸大鼠的产物长度 鉴定裸大鼠Foxn1突变基因型。 不需要额外设计 探针或荧光引物， 也不需要配置价格高昂的仪器 设备且操作简单， 操作简单、 快速， 对仪器要求 低， 对操作人员技术要求低、 花费少， 仅通过PCR 和琼脂糖电泳即可快速鉴定裸大鼠Foxn1突变基 因型。 权利要求书1页 说明书5页 序列表2页 附图2页 CN 114958987 A 2022.08.30 CN 114958987 A 1.一种ARMS ‑PCR法鉴定裸大 鼠Foxn1突变基因型的组合物， 其特征在于， 基于裸大 鼠 Foxn1基因外 显子1429号碱基发生C 到T的突变， 包括引物组合物： Foxn1‑rat‑FI： 5’ ‑CTGGACACCAGCAGCCATTGTTTTAAC‑3’(SEQ ID NO.1)， Foxn1‑rat‑RI： 5’ ‑TGCAGATCA AGATGCCCATCTGGATA‑3’(SEQ ID NO.2)， Foxn1‑rat‑FO： 5’ ‑AACTGGGTTCTCCTCTGCTAG GATGTCC‑3’(SEQ ID NO.3)， Foxn1‑rat‑RO： 5’ ‑GGTCTCCGTCTGGTAGCAGAGTATCGTG ‑3’(SEQ ID NO.4)。 2.一种ARMS ‑PCR法鉴定裸大鼠Foxn1突变基因型的方法， 其特征在于， 以待测Foxn1突 变裸大鼠的基因组DNA为模板， 按照权利要求1所述的ARMS ‑PCR法鉴定裸大鼠Foxn1突变基 因型的组合物进 行PCR扩增， 得到PCR产 物， 凝胶电泳成像， 根据电泳结果中裸大鼠的产 物长 度鉴定裸大鼠Foxn1突变 基因型。 3.如权利要求2所述的ARMS ‑PCR法鉴定裸大鼠Foxn1突变基因型的方法， 其特征在于， 具体包括以下步骤： S1、 设计引 物， 基于裸大鼠Foxn1基因外显子1429号碱基发生C到T的突变， 通过引物设 计软件获得用于ARMS ‑PCR法鉴定裸大鼠Foxn1突变 基因型的引物组合物； S2、 提取待检测裸大鼠的组织或细胞或尾尖的基因 组DNA； S3、 以步骤S2中的待检测裸大鼠的基因组DNA为模板， 按照步骤S1中得到的引物组合物 进行PCR扩增， 得到PCR产物； S4、 步骤S3的PCR产物进行凝胶电泳成像， 根据电泳结果中裸大鼠的产物长度鉴定裸大 鼠Foxn1突变 基因型。 4.如权利要求2所述的ARMS ‑PCR法鉴定裸大鼠Foxn1突变 基因型的方法， 其特 征在于， 以待测Foxn1突变裸大鼠的基因组DNA为模板， 使用引物组合物进行基因型鉴定时， 若 电泳结果中裸大鼠的产物长度为274bp和402bp， 则裸大鼠Foxn1突变基因型为纯合子； 若电 泳结果中裸大鼠的产物长度为181bp和402bp， 则裸大鼠Foxn1突变基因型为野生型； 若电泳 结果中裸大鼠的产物长度为181bp和274bp和402bp， 则裸大鼠Foxn1突变 基因型为杂合子 。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114958987 A 2ARMS‑PCR法鉴定裸大鼠Foxn1突变基因型的组合物及方 法 技术领域 [0001]本发明是关于基因检测的技术领域， 特别是关于ARMS ‑PCR法鉴定裸大鼠Foxn1突 变基因型的组合物及方法。 背景技术 [0002]在现代实验动物科学的发展中， 免疫缺陷动物已成为引人注目的里程碑， 并给生 命科学工作者以新的启迪， 给生命科学带来革命性的变化， 免疫缺陷动物作为科学研究与 产品质量检验必不可少的条件资源， 已成为当今整个生命科学研究中不可缺少的活 “试 管”。 [0003]裸大鼠(无胸腺大鼠,无毛大鼠,nude  rats)， 裸鼠(裸小鼠)(nude  mouse)从出生 终身无毛,裸小鼠是没有胸腺的小鼠。 先天性无胸腺大鼠主要的特点是体毛稀少， 而裸小鼠 则完全无毛。 纯合裸大鼠鼻毛、 触须还存在， 易弯曲， 这是用以确认刚出生裸大鼠是否纯合 的标志。 其头部和身体其它部位常有一些短毛， 往往不同裸大鼠个体会有很大差异。 不同周 期裸大鼠毛发生长存在差异， 大约在裸大鼠出生后的2～6周内， 其体表有一层看似棕色鳞 状薄片， 但随后体表变得光滑无毛， 再过一段时间， 有些裸大鼠的体表会生成一部分的毛 发， 但是不久后这些毛发又会陆陆续续脱落。 特别是雄纯合鼠(rnu/rnu)突变种尤为明显， 纯合裸大鼠往往还生长一些短及细的毛。 所以， 不同裸大鼠个体出现体征时间差异很大， 单 凭眼观与经验不能判定裸大鼠Foxn 1突变基因型， 以往的裸大鼠Foxn 1突变基因型鉴定方法 需要将PCR产物送至测序公司测序， 并对返回测序结果进行分析后才能判定裸大鼠Foxn1突 变基因型， 此方法又费时有费力， 因此需要更加简 便快捷的裸大鼠Foxn 1突变基因型鉴定方 法。 [0004]公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解， 而不应 当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域 一般技术人员所公知的现有技 术。 发明内容 [0005]本发明的目的在于提供ARMS ‑PCR法鉴定裸大鼠Foxn1突变基因型的组合物及方 法， 其操作简单、 快速， 对仪器要求低， 对操作人员技 术要求低、 花费少。 [0006]为实现上述 目的， 本发明提供了一种ARMS ‑PCR法鉴定裸大鼠Foxn1突变基因型的 组合物， 基于裸大鼠Foxn1基因外 显子1429号碱基发生C 到T的突变， 包括引物组合物： [0007]Foxn1‑rat‑FI： 5’ ‑CTGGACACCAGCAGCCATTGTTTTAAC‑3’(SEQ ID NO.1)， [0008]Foxn1‑rat‑RI： 5’ ‑TGCAGATCA AGATGCCCATCTGGATA‑3’(SEQ ID NO.2)， [0009]Foxn1‑rat‑FO： 5’ ‑AACTGGGTTCTCCTCTGCTAG GATGTCC‑3’(SEQ ID NO.3)， [0010]Foxn1‑rat‑RO： 5’ ‑GGTCTCCGTCTGGTAGCAGAGTATCGTG ‑3’(SEQ ID NO.4)。 [0011]本发明还提供一种ARMS ‑PCR法鉴定裸大鼠Foxn1突变基因型的方法， 以待测Foxn1 突变裸大鼠的基因组DNA为模板， 按照上述的ARMS ‑PCR法鉴定裸大鼠Foxn1突变基因型的组 合物进行P CR扩增， 得到P CR产物， 凝胶电泳成像， 根据电泳结果中裸大鼠的产 物长度鉴定裸说　明　书 1/5 页 3 CN 114958987 A 3