ICS 65.020.20 B 21 DB45 广 西 壮 族 自 治 区 地 方 标 准 DB 45/T 1655—2017 芋头组培苗生产技术规程 Production technical practice for tissue seedling of taro 2017 - 12 - 30 发布 广西壮族自治区质量技术监督局 2018 - 01 - 30 实施 发 布 DB45/T 1655—2017 目 次 前言 ................................................................................ II 1 范围 .............................................................................. 1 2 规范性引用文件 .................................................................... 1 3 术语和定义 ........................................................................ 1 4 生产设备和化学试剂 ................................................................ 2 5 灭菌操作 .......................................................................... 2 6 培养室环境条件控制 ................................................................ 2 6.1 温度 .......................................................................... 2 6.2 湿度 .......................................................................... 2 6.3 光照 .......................................................................... 2 7 生产工艺流程 ...................................................................... 2 8 生产操作 .......................................................................... 3 8.1 培养基配制 .................................................................... 3 8.2 外植体选择及消毒 .............................................................. 4 8.3 接种和增殖培养 ................................................................ 4 8.4 组培苗的生根和培养 ............................................................ 5 8.5 组培苗变异控制及淘汰 .......................................................... 5 9 组培苗质量要求 .................................................................... 5 9.1 品种 .......................................................................... 5 9.2 组培苗质量要求 ................................................................ 5 10 生产管理规章制度 ................................................................. 6 10.1 生产管理制度 ................................................................. 6 10.2 生产记录及档案建立 ........................................................... 6 附录 A（资料性附录） 芋头组培生产常用 MS 培养基成分及母液配制表 ....................... 7 附录 B（资料性附录） 芋头组培苗生产常用植物生长调节剂浓度及配制方法 .................. 8 I — DB45/T 1655 2017 II — DB45/T 1655 2017 前 言 — 本标准按GB/T 1.1 2009给出的规则起草。 本标准由广西壮族自治区农业科学院提出。 本标准起草单位：广西农业科学院生物技术研究所、广西标准化协会。 本标准主要起草人：闭志强、董伟清、江文、韦绍龙、陈丽娟、罗松、高美萍、何芳练、谢宏昭、 韦泽昭、欧昆鹏、唐军、蔡炳华、桂杰、苏宾、蒋慧萍、王艳、张尚文、黄诗宇。 III — DB45/T 1655 2017 芋头组培苗生产技术规程 1 范围 本标准规定了芋头(Colocasia esculenta (L.) Schoot)组培苗生产的术语和定义、生产设备和化 学试剂、消毒灭菌操作、培养室环境控制、生产工艺流程、生产操作、组培苗质量要求、生产管理规章 制度等技术要求。 本标准适用于广西境内芋头组培苗生产。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 NY/T 2306 花卉种苗组培快繁技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 芋头 又称芋、芋艿。以地下球茎为生产产品的天南星科芋属作物。 3.2 母芋 种芋发芽长成新植株，由其基部短缩茎膨大而形成的球茎。 3.3 子芋 母芋的腋芽萌发生长并积累营养发育形成的小球茎。 3.4 外植体 母芋侧芽和子芋顶芽的顶端生长点。 3.5 假植苗 将合格的组培生根苗移栽到装有营养基质的营养杯（育苗袋、育苗盘）中培育成供大田定植栽培的 植株。 1 — DB45/T 1655 2017 3.6 变异株 在组培生产过程中受到种源纯度、培养基成分、培养条件等因素的影响，导致生产出的组培植株表 现与原来品种的植株在形态特征（如叶色、叶形、球茎大小、球茎形状、植株高矮等）存在有明显差异 的植株。 3.7 茎粗 组培苗假茎基部的直径。 3.8 株高 组培苗植株假茎底部至植株最长叶柄顶端的距离。 3.9 变异率 批次生产变异株数与该批次总生产植株数的百分比率。 4 生产设备和化学试剂 生产设备和化学试剂按 NY/T 2306执行。 5 灭菌操作 按NY/T 2306执行。 6 培养室环境条件控制 6.1 温度 培养室温度控制在（26±2） ℃。 6.2 湿度 培养室保持70％～80％的相对湿度。 6.3 光照 接种后先在遮光条件下暗培养1周,后在光照强度1 000 lx～2 000 lx，每天12 h～16 h条件下培养.； 7 生产工艺流程 生产工艺流程见图1。 2 — DB45/T 1655 2017 培养基的选择 ↓ 母液的配制及保存 ↓ 培养基配制 ↓ 外植体选择 ↓ 取材及消毒 ↓ 接种 ↓ 萌发培养 ↓ 分化培养 ↓ 继代培养(淘汰变异) ↓→(取2～3代株系作病毒检测) 组培生根苗的选择(淘汰变异) ↓ 组培苗根的诱导和培养(淘汰变异) ↓ 炼苗(淘汰变异) ↓ 出厂 图1 组培苗生产工艺流程图 8 生产操作 8.1 培养基配制 8.1.1 培养基选择 据 比 材 类型 育特 相适应的基本培养基种类和植物生长调节剂种类、浓 参见附录A。 根 培养 料品种 及生长发 性选择 度、配 。芋头组 培养常用MS基本培养基成分 织 8.1.2 培养基母液配制及保存 8.1.2.1 培养基母液配制 据 参见 情况 类型配制成单一化合物母液，也可以配制成几种化合物的混合 根 生产 ，可以按培养基的成分 母液 附录A。 3 — DB45/T 1655 2017 8.1.2.2 培养基母液保存 母液配制好后，置放入4 ℃的冰箱中保存，宜在30 d内用完。存放期间，如有沉淀，则废弃，重配 新母液。 8.1.3 培养基的配置 按附件A的比例要求，根据要配置的培养基的数量，分别量(称)取母液、糖、添加剂、固化剂,先用 总需量80％的蒸馏水混合，边搅拌边加热使固化剂熔化，用1 mol的HCl或1 molNaOH调整pH,后用蒸馏水 定容至所需容量，趁热按每瓶（袋）30 mL的量分装至240ml的培养瓶（100 mm×120 mm聚丙烯培养袋） 中并封好瓶（袋装消毒盒）盖，经121 ℃20 min高压蒸汽消毒,于室温凝固，存放（3 d～5 d）选择无菌 污染的培养基接种。 8.2 外植体选择及消毒 8.2.1 外植体选择 宜从生长健壮、无病虫害、能保证原品种优良性状的母芋侧芽和子芋顶芽的顶端生长点上选取。 8.2.2 外植体取材及消毒 在超净台上截取直径5 mm～10 mm，长10 mm～20 mm茎尖段，先用70％酒精浸泡10 s，无菌水冲洗2～ 3次，再用0.1％～0.2％升汞消毒5 min～10 min,或2％次氯酸钠浸泡10 min～15 min,最后用无菌水冲洗 3～5次，沥干封存于经灭菌的培养瓶内供接种用。 8.3 接种和增殖培养 8.3.1 接种 取经消毒处理的外植体，在无菌垫纸（或铝片）上切取0.3 mm～0.6 mm的茎尖组织。 8.3.2 萌发培养 将切取的外植体，接种在MS+6-BA0.1 mg/L～1.0 mg/L+NAA0.01 mg/L～0.1 mg/L萌发培养基上，10 d～ 15 d后，选择无污染且已萌发的外植体再进行分化