(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211230922.2 (22)申请日 2022.09.30 (71)申请人 深圳市北 科生物科技有限公司 地址 518000 广东省深圳市南 山区粤海街 道高新南九道59号北 科大厦16楼 (72)发明人 李政　钟桂强　韦棋　王清芳　 陈辉　张芬　钟振忠　梁晓　 (74)专利代理 机构 深圳市精英专利事务所 44242 专利代理师 李莹 (51)Int.Cl. C12N 5/078(2010.01) A01N 1/02(2006.01) C12M 1/26(2006.01) C12M 1/00(2006.01) (54)发明名称 一种外周血 单个核细胞分离方法 (57)摘要 本发明公开了一种外周血单个核细胞分离 方法， 涉及细胞分离技术领域。 本发明提供分离 方法， 采用分离装置对外周血单个核细胞进行分 离， 通过取样单元将采血袋内的外周血样品经过 连接件转移到静置袋中。 进一步地， 通过加样单 元将羟乙基淀粉， 经过连接件添加到静置袋中， 使羟乙基淀粉与血液混匀。 之后密封静置袋与连 接件之间的管路， 将静置袋倒挂静置， 使转移袋 位于静置袋的上侧。 待静置袋内的上清液与沉淀 分层时， 通过缓慢挤压 静置袋将上清液转移到转 移袋中， 从而实现对上清液中的外周血单个核细 胞的快速分离。 利用本发明提供的外周血单个核 细胞分离方法进行外周血单个核细胞分离， 具有 分离效率高， 对细胞损伤小， WBC回收率高的优 点。 权利要求书2页 说明书9页 附图1页 CN 115521910 A 2022.12.27 CN 115521910 A 1.一种外周血单个核细胞分离方法， 其特征在于， 采用分离装置对外周血单个核细胞 进行分离， 所述分离装置， 包括取样单元、 加样单元、 连接件、 静置袋以及转移袋； 所述取样 单元、 加样单元以及所述静置袋均与所述连接件连接， 所述连接件将所述静置袋与所述取 样单元以及所述加样单元连通； 所述静置袋与所述转移袋之间用管道连通； 所述转移袋连 接有末端封闭的管道； 所述分离方法包括以下步骤： S1、 使用消毒酒精对采血袋表面进行消毒， 传入正常开启的生物安全柜内， 并轻揉采血 袋， 使袋内血 液充分混匀； S2、 利用取样单元对采血袋内的血液进行取样， 使血液经连接件由采血袋转移至静置 袋内； S3、 向加样单元中加入羟乙基淀粉， 使羟乙基淀粉经连接件转移至静置袋 内， 与血液充 分混匀； S4、 封闭连接件与静置袋之间的连通管路， 将静置袋倒挂， 进行 血液静置分离； S5、 待静置袋内的上清与沉淀比例达 到1:1时， 将上清液由静置袋转移至转移袋内； S6、 使用消毒酒精对转移袋连接的末端封闭管道进行消毒， 用无菌剪刀剪开管道， 将转 移袋内的上清液转移至 离心管内； S7、 将装有上清液的离心管， 使用移液 管取样计算细胞 数量及活率； S8、 在室温下， 以参数为20 0‑500g、 3‑10min对S7的离心管进行离心； S9、 去除离心上清， 根据S7的计数结果， 按预设冻存密度加入提前4℃预冷的冻存液， 混 匀分装至冻存管内， 得到装有单个核细胞的冻存管； S10、 将分装于冻存管的单个核细胞进行程序降温， 降温结束后转移至 ‑150℃以下的液 氮罐储存。 2.如权利要求1所述的外周血单个核细胞分离方法， 其特征在于， 所述步骤S1和S2之间 还包括： 使用一次性注射器从采血袋的开口端穿刺取样， 用于全血细胞计数。 3.如权利要求1所述的外周血单个核细胞分离方法， 其特征在于， 所述步骤S1之前还包 括对采血袋称重， 获取 血液的重量， 通过 单位换算将血 液的重量单位换算 为体积单位。 4.如权利要求1所述的外周血单个核细胞分离方法， 其特征在于， 所述步骤S3中， 按羟 乙基淀粉的体积与血 液的体积比为1:3～1:5的比例进行 添加。 5.如权利要求1所述的外周血单个核细胞分离方法， 其特征在于， 所述步骤S9中， 预设 的冻存密度为1*107～4*107个/ml。 6.如权利要求1所述的外周血单个核细胞分离方法， 其特征在于， 所述步骤S9中， 所述 冻存液由基础免疫培 养基、 DMSO和人 血红蛋白按18 :1:1的体积比混合配制而成。 7.如权利要求1所述的外周血单个核细胞分离方法， 其特征在于， 所述步骤S5中， 使用 分浆夹将上清由静置袋转移至转移袋内。 8.如权利要求1所述的外周血单个核细胞分离方法， 其特征在于， 所述步骤S4中封闭连 接件与静置袋之间的连通管路， 具体是指采用热合密封的方式来封闭连接件与静置袋之间 的连通管路。 9.如权利要求1所述的外周血单个核细胞分离方法， 其特征在于， 所述取样单元与 连接 件之间的连通管道上设有第一 开关， 用于控制取样单 元与连接件之间的管路连通状态；权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115521910 A 2所述静置袋与 所述转移袋之间的连通管道上设有第 二开关， 用于控制静置袋与所述转 移袋之间的管道连通状态。 10.如权利要求1所述的外周血单个核细胞分离方法， 其特征在于， 所述分离装置在使 用前先辐照灭菌， 使其处于无菌状态。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115521910 A 3