ICS 13.300;13.020.40 CCS A 80 中华人民共和国国家标准 GB/T 42879—2023 化学品 新西兰泥蜗（Potamopyrgus antipodarum）繁殖试验 ChemicalsPotamopyrgus antipodarum reproduction test 2023-08-06发布 2023-12-01实施 国家市场监督管理总局 发布 国家标准化管理委员会 GB/T 42879—2023 目 次 前言 引言 1 范围 2 规范性引用文件 3 术语和定义 试验原理 受试物信息 6 参比物 7 方法描述 试验程序 9 质量保证与质量控制 10 数据处理· 11 报告· 附录A（资料性）新西兰泥蜗的驯养 附录B（资料性） 新西兰泥蜗的图片和软体示意图 12 附录C（资料性） 样本数据记录表 13 附录D（资料性）时间-加权平均浓度的计算 15 参考文献 GB/T42879—2023 前言 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由全国危险化学品管理标准化技术委员会（SAC/TC251)提出并归口。 与化学品管理技术中心、中国检验检疫科学研究院、上海市检测中心、厦门市格灵生物技术有限公司、生 态环境部南京环境科学研究所、沈化测试技术（南通）有限公司、中国化工信息中心有限公司、中国化工 经济技术发展中心、浙江亚旺科技有限公司。 本文件主要起草人：曾国驱、刘纯新、安超、陈桂兰、杨旭楠、王青柏、梁燕珍、黄叶梅、高亮、许玫英、 周丽丽、郭敏、张瑛、赖伟、李建威、梁诗捷、赵玉艳、陈智勇、王哲思。 GB/T42879—2023 引言 本文件用于评价长期暴露下化学品对新西兰泥蜗（Potamopyrgusantipodarum）繁殖和生殖后代 存活的潜在影响。 要性，特别强调了这类在生态和经济上具有重要地位的生物在毒性试验方法方面的缺失。 试验暴露28d后，测定死亡率并以每只雌蜗所产的胚胎总数（不区分发育阶段）来评价其繁殖量。 如采用本方法对混合物开展测试并将获得的数据用于监管时，需考虑试验结果是否充分且有效 如有法规明确规定可对混合物进行测试，则可直接采用本文件 V GB/T 42879—2023 化学品新西兰泥蜗（Potamopyrgus antipodarum）繁殖试验 1范围 本文件描述了化学品新西兰泥蜗繁殖试验的试验原理、受试物信息、参比物、方法描述、试验程序、 质量保证与质量控制、数据和报告。 本文件适用于化学品的新西兰泥蜗繁殖试验。 2规范性引用文件 2 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 本文件。 GB/T 21801 化学品 快速生物降解性 生呼吸计量法试验 GB/T21802 化学品 快速生物降解性改进的MITI试验（I) GB/T 21803 化学品 快速生物降解性DOC消减试验 GB/T 21856 化学品 快速生物降解性 二氧化碳产生试验 GB/T21857 化学品 快速生物降解性改进的OECD筛选试验 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 x%效应浓度x%effectconcentration;EC 暴露期间引起新西兰泥蜗繁殖量降低%时的受试物浓度 3.2 最低可观察效应浓度lowestobservedeffectconcentration；LOEC 暴露期间与对照相比，对受试生物产生显著效应（P<0.05）（繁殖量和死亡率）的最低受试物浓度。 注：LOEC以上的所有试验浓度所产生的毒性效应等于或者显著高于LOEC中所观察到的毒性效应。 3.3 无可观察效应浓度noobservedeffectconcentration；NOEC 在暴露期间与对照组相比，对受试生物未产生显著效应（p<0.05)的受试物浓度。 3.4 死亡mortality 受试生物停止活动。 注：用镊子轻轻触碰受试生物的蜗足或蜗（如果泥蜗缩进蜗壳内)未见反应，视为死亡。 4试验原理 试验主要目的是通过统计暴露28d结束后孵育囊中的胚胎数量（不区分发育阶段）来评价化学品 1 GB/T42879—2023 对新西兰泥蜗繁殖量的影响。将蜗暴露于一定浓度范围的受试物中进行试验，当受试物为难测试化合 物（如受试物为易挥发、不稳定、可快速生物降解和吸附性物质）时，试验应采用流水式试验来代替半静 态方式（见8.3），28d暴露期结束后考察蜗的存活率和试验结束时蜗的繁殖情况。受试物对胚胎数量 的毒性效应以EC，或无可观察效应浓度和最低可观察效应浓度（NOEC/LOEC)来表征。 受试物对胚胎数量的毒性效应以EC或无可观察效应浓度（NOEC和最低可观察效应浓度 (LOEC)来表征，前者通过采用合适的回归模型拟合后估算导致胚胎数量出现r%下降时的受试物浓 度。试验浓度应包括出现效应的最低浓度（例如EC1o），该浓度通过内插法而非外推法得出。 5 受试物信息 在试验前，应掌握受试物的下列信息： a）结构式； b)丝 纯度； 光稳定性； d) 试验条件下的稳定性； e） 水解作用； f) 解离常数(pKa)； g） 正辛醇/水分配系数（Pow）； h) 按照GB/T21801、GB/T21802、GB/T21803、GB/T21856、GB/T21857测定的快速生物降 解性； i) 水中溶解度； j) 蒸气压； k) 受试物在水溶液中的定量分析方法、回收率和定量限。 6参比物 为确保受试生物和试验条件的一致性和敏感性，应定期或在需要时开展参比物试验。已得到验证 的参比物质包括：氯化镉、三丁基氯化锡（TBT-Sn）和咪鲜胺，其对以新西兰泥蜗胚胎数量作为繁殖量 （见8.6）的ECso范围分别是5μg/L~20μg/L（以Cd计）、35ng/L~190ng/L和100μg/L~800μg/L (以a.i.计)。 7方法描述 7.1 仪器设备 试验容器或其他与试验溶液接触的器血应为全玻璃或其他化学情性材料制成，测试过程中如使用 塑料材质的容器应确保无增塑剂或其他化合物浸出。常用的仪器设备包括： a)J 用穿孔盖或纱布覆盖的500mL烧杯或其他可透气的防止试验蜗逃逸的器具； b) 空气泵、空气管和巴斯德管； c) 用于气流控制的可调节阀； d) 用于配制溶液的容量瓶和其他玻璃器血； 玻璃移液管； f) 溶解氧测定仪； pH计; 2 GB/T42879—2023 h）电导率仪； i) 用于测量水中氨氮、亚硝酸盐、硝酸盐、总有机碳和水硬度的试剂盒或其他相关的设备； j) 装有光源的体视显微镜； k) 用于控制温度、光照的人工气候室或空调室或其他合适的设备； 1)角 解剖盘和解剖器械。 7.2受试生物 7.2.1试验以新西兰泥蜗（Potamopyrgusantipodarum）为受试生物。用于验证试验的亲蜗属于单倍 型t和形态型“WarwickA”，因此建议使用单倍型t和形态型“WarwickA”的亲蜗进行试验。单倍型t 和形态型“WarwickA”具有明显不同的遗传和解剖标记。 7.2.2试验用蜗应为实验室饲养、取自同一群体的健康成蜗（即未表现任何受胁迫现象，如死亡率高、 繁殖力差和寄生虫感染等）。亲蜗应在相同的环境条件（光照、温度、培养基和喂食）下进行驯养（新西兰 泥蜗的驯养见附录A）。如通过市售购买亲蜗，获得后至少需开展2周的试验前驯养以避免生物受到胁 迫。由于不清楚泥蜗的（污染）历史，不宜采用野外获得的蜗开展试验。 7.3配制水（合成水）/试验培养基 7.3.1应使用配制水作为唯一的试验培养基。将3g海盐（或等效海盐）和1.8g碳酸氢钠溶解于10I 去离子水中配制成配制水（合成水）。配制水（即添加饲料之前）中总有机碳质量浓度应小于2mg/L，应 在惰性材料（如玻璃或不锈钢）的容器中制备，而且容器的容积需足够大，例如50L玻璃缸，制成后储存 备用。配制水宜在黑暗中室温保存，并于2周内使用，使用前应至少曝气24h。 7.3.2配制水应符合下列水质参数要求： a)pH.8.0±0.5; b）氧饱和度：大于空气饱和值的60%； 电导率：770μS/cm±100μS/cm 1( d）总有机碳：小于2mg/L。 7.3.3试验容器盛装400mL的配制水，用穿孔盖或纱布覆盖确保与外部保持空气流通。玻璃烧杯应 每周更换。可将各平行的溶液混合后分析受试物浓度，有时为了满足分析要求可能需要制备更大容量 的试验液。 7.4试验溶液 7.4.1通过稀释备液得到不同浓度的试验溶液。采用搅拌、超声波处理或其他适当的方法，将受试 物溶解于配制水来制备贮备液，尽量避免使用助溶剂或分散剂。对于难测试化学物质可参考文献。如 果使用助溶剂以配制适当浓度和均匀的贮备液，其最终浓度应尽可能低，且不应超过20L/L。除了配 制水对照组外，应增设一个助溶剂对照组。在所有的试验浓度组和助溶剂对照组中，助溶剂的浓度应保 持相同。 7.4.2根据受试物的物理化学性质和试验敏感性选择合适的助溶剂，助溶剂应在试验的前期确定。所 用的助溶剂和分散剂应对亲蜗的繁殖无明显效应。对于助溶剂的选择，可以参考关于难测试化学物质 毒性测试的文献。在验证试验中，使用的助溶剂包括二甲基亚砜（DMSO）、三乙二醇（TEG）、内酮和冰 醋酸。二甲基亚砜、三乙二醇和丙酮的特点是毒性低（对亲蜗的NOEC≥12.5mL/L，至少高于助溶剂 在试验中最高浓度20μL/L的625倍），而且不会在试验容器中形成生物膜。相反，使用乙醇作为助溶 剂，