ICS 65.020 B 17 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T3275.12018 化学农药 天敌昆虫慢性接触毒性 试验准则 第1部分：七星飘虫 Chemical pesticideGuidelinefor chronic contact toxicity to insect natural enemy- 行业标准信息服务平台 Part 1:Coccinella septempunctata 2018-07-27发布 2018-12-01实施 中华人民共和国农业农村部发布 NY/T3275.1—2018 前言 NY/T3275《化学农药天敌昆虫慢性接触毒性试验准则》，拟分为2个部分： 第1部分：七星瓢虫； 第2部分：赤眼蜂。 本部分为NY/T3275的第1部分。 本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本部分由农业农村部种植业管理司提出并归口。 本部分负责起草单位：农业农村部农药检定所、中国矿业大学（北京）。 本部分主要起草人：于彩虹、周欣欣、程沈航、薛明明、姜辉、翟唯钢、谭丽超、卜元卿。 行业标准信息服务平台 I NY/T3275.1—2018 化学农药 天敌昆虫慢性接触毒性试验准则 第1部分：七星飘虫 1范围 本部分规定了天敌瓢虫慢性接触毒性试验的试 验方法、试鸭 验操作、数据处理、质量控制、试验报告等 的基本要求。 本部分适用于为化学农药登记而进行的天敌瓢虫慢性接触毒性试验，其他类型农药可参照使用。 P 2规范性引用文件 下列文件对于本文件 期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引 用文体 其新 NY/T3088—2012 天敌昆 急性接触毒性试验准 3术语和定义 S 下列术语和定 义适 用于本 3. 1 供试物test subs 试验中需要测试的物质 3. 2 成虫前半致死剂量 median lethe 在成虫前，引起 时的供 物剂量用工 3. 3 50%效应剂量 aDeffe 在成虫羽化后，产量 影响时对应的供试物剂量用 4试验概述 采用药膜法处理飘虫幼虫 将不同浓度 小布在 积的玻璃管（板）或叶 物 液定理 一定面 片表面，将试验用飘虫幼虫放人其中上）胁迫泰露 每天观条和记录飘虫的中毒症状和死亡数，直至处 理组成虫羽化。将同一处理组中存活的 内成虫集中收集在合适的容器中完成交配，期间饲喂足量的虫， 在产卵达到稳定状态后，统计产卵量；将卵统 收集储存，在人候培养箱中进行孵化，最后统计幼虫 的孵化率。 5试验方法 5.1试验材料 5.1.1供试生物 选用孵化3d～4d的七星瓢虫二龄幼虫作为供试生物。为获取相同虫龄的幼虫试虫，应将收集到 的卵标明收集时间，将含有卵块的纸片或叶片放人特定的容器中，置于恒温条件（25℃）下培养，在卵孵 化之前，所处的环境与试验环境始终相同，收集相同时间孵化的幼虫作为测试生物。 1 NY/T3275.1—2018 5.1.2食物的选择 各种新鲜存活的蚜虫，都可以用来饲养瓢虫幼虫和成虫。在收集蚜虫饲喂飘虫幼虫时应避免成蚜。 5.1.3供试物溶解 农药制剂、原药或纯品。制剂用蒸馏水溶解，原药或纯品用丙酮等溶剂溶解。原药可用少量对飘虫 毒性小的有机溶剂、乳化剂或分散剂等助溶。 5.1.4供试物浓度设置 根据测试要求设计一系列浓度梯度，以获得供试物对繁殖力产生50%影响的浓度（ER50）。如在飘 虫急性试验的基础上考察供试物对繁殖力的影响，选择成虫前死亡率低于60%的试验组进行慢性试 验。如做限量（度）试验，浓度为田间最大推荐用量乘以多次施药因子（MAF）。 5.1.5主要仪器及设备 智能人工气候培养箱。 天平。 容量瓶。 移液器。 玻璃板。 定量的喷雾装置（适用玻璃板药膜法）。 玻璃管。 滚管机。 环行防护罩。 培养皿。 瓢虫饲养装置等。 5.1.6试验条件 5.1.6.1温度 瓢虫的饲养温度范围应在23℃～27℃。 5.1.6.2湿度 相对湿度控制应在60%~90%。 5.1.6.3光照 光照周期（光暗比）为16h：8h，光照强度不低于10001x。 5.2试验操作 5.2.1处理设置 羽化前死亡率测试需要设参比对照组（本标准选用乐果作为参比物质）和空白对照组。供试物用有 机溶剂溶解时，需设溶剂对照组。处理组和对照组均设置3个重复，每个重复至少10头飘虫幼虫。参 比对照组不需要进行繁殖力测定。 5.2.2羽化前死亡率测试 试验采用玻璃药膜法，将孵化后3d～4d的二龄幼虫接人施药后的玻璃管内或玻璃板上，期间用毛 刷将叶片上的足量鲜活的蚜虫轻轻扫人暴露装置，对飘虫进行饲喂，并定期对飘虫排泄物和蚜虫残骸进 行清理，保证瓢虫和药膜的充分接触。药膜的制备方法按照NY/T3088—2017中4.2.1.2的规定 执行。 5.2.3 3繁殖力测定 当对照组中存活的幼虫至少有90%的成虫羽化出来时，用显微镜确定其性别，遗弃孵化晚的瓢虫。 将同一处理组中飘虫集中收集饲养在合适的容器内，完成充分交配。每升容器最多有10头飘虫，并且 飘虫的性别比例尽可能相同。对照组的瓢虫数目应与处理组相似。折叠滤纸或是黑色的纸，滚成圆筒简 2 NY/T3275.1—2018 状置于容器上，引诱瓢虫将卵产在其上，纸片每天都需要更换。容器的底部需要衬上滤纸以便于吸收残 留物，方便容器的清理。每周更换一次培养容器，防止疾病产生。当飘虫置于培养容器之后，至少每升 容器提供3株～5株蚜虫滋生的植物或植物枝条作为食物来源。当对照组的熟虫开始产卵1周并趋于 稳定后，开始进行繁殖力的评估。在接下来的2周，产卵基质需要每天更换，将包含有卵的滤纸和叶片 区域剪掉并收集起来，在相同试验条件下进行储存直到幼虫孵化，并记录孵化率。每天记录飘虫的死亡 数目、产卵量以及卵的孵化数目。 试验也可以将飘虫成对地转人皮氏培养血中，每个培养血中放置一对。提供感染足够多蚜虫的叶 片作为食物，或者直接用毛刷将叶片上的蚜虫轻轻扫人培养血中。当对照组的飘虫开始产卵1周后，在 接下来的2周内进行繁殖力的评估。 5.2.4观察与记录 每天观察并记录暴露于玻璃管（板）或叶片的飘虫的中毒症状和死亡数，将死亡的幼虫、蛹与行为异 常的一起记录（如活动不灵活的、抽搐的）直至化。化蛹后，蛹继续保持在药膜管内观察至成虫羽化， 计算成虫羽化率，未羽化成虫均计人死亡虫数。如果幼虫或蛹的减少是由于操作失误（如幼虫逃逸或意 外致死），成虫前死亡率的计算就需要用初始数据减去减少的幼虫。 6数据处理 6.1成虫前死亡率 在试验中逃逸或意外致死的幼虫（）计算时不需计入。处理组的死亡率要按式（1）通过对照组进 行修正。 M= X100.... (1) (100- 式中： 一相对死亡率，单位为百分率（%）； 对照组死亡率的百分比（去掉%号）； 处理组死亡率的百分比（去掉%号）。 6.2单头雌性成虫有效产卵量 单头雌性成虫有效产卵量（F）按式（2）计算。 F=nXh (2) 100 式中： 单头雌性成虫有效产卵量，单位为粒； 信息服务平台 单头雌性成虫产卵量，单位为粒： n- h—孵化率（去掉%号）。 6.3相对繁殖性能 相对繁殖性能（R）的修正按式（3）进行。 R= (3) F(c) 式中： R 一一相对繁殖性能，单位为百分率（%）； F（c）一对照组的有效单虫产卵量，单位为粒； F(t）一处理组的有效单虫产卵量，单位为粒。 7质量控制 质量控制条件包括： 3 NY/T3275.1—2018 成虫羽化之前空白对照组死亡率不能超过20%； a) 整个试验过程要保证提供足够的健康活跃蚜虫作为飘虫食物； b) 对照组蛹期的幼虫羽化率不低于85%，对照组成虫2周单雌产卵量不低于400头，对照组卵孵 c) 化率不低于70%； 参比物质试验中，在0.20ga.i./hm²乐果剂量下，测试瓢虫幼虫死亡率在40%~90%，则该 (P 种群可用于试验； 为了保证慢性阶段试验数据的准确性，根据试验情况1d之内尽量多次检查产卵量和孵化率。 e) 试验报告 试验报告应包括下列内容： 供试物的信息，包括供试农药的通用名， 构式、CAS号、纯度、基本理化性质、来 a) U 源等； b) 供试生物名称 c) 试验条件， 照条件等 d) 试验方法 包括 、所用装置等 e) 试验用 丙液 f) 对照组及处 理组是 g) 试验 质量 描述 h) 试验结果 及毒性 价 TURA GRI 支务平台 NY/T3275.1—2018 参考文献 [1]吴红波，张帆，王素琴，等，2017.几种常用杀虫剂对异色飘虫的敏感性测定[].中国生物防治学报，23（3：213-217. [2]王秀梅，侯志广，李天昊，等，2011.阿维菌素对异色飘虫不同发育阶段的影响[J].农药，50（10）：737-739. [3JSchmuck R,Candolfi M P,Kleiner R,et al,2000.Alaboratory test system for assessing effects of plant protection products on the plant dwelling insect Coccinella septempunctata L.(ColeopteraCoccinellidae)[MJ//M P Candolfis, Blumel R,Forster F M,et al. Guidelines to evaluate side-effects of plant protection products to non-target arthropods. IOBC/