ICS 65.020 B 17 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T3275.2—2018 化学农药 天敌昆虫慢性接触毒性 试验准则 第2部分：赤眼蜂 Chemical pesticide-Guideline for chronic contact toxicity to insect natural enemy- 行业标准信息服务平台 Part 2:Trichogramma 2018-07-27发布 2018-12-01实施 中华人民共和国农业农村部发布 NY/T3275.2—2018 前 NY/T3275《化学农药天敌昆虫慢性接触毒性试验准则》，拟分为2个部分： 第1部分：七星飘虫； 第2部分：赤眼蜂。 本部分为NY/T3275的第2部分。 本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本部分由农业农村部种植业管理司提出并归口。 本部分起草单位：农业农村部农药检定所。 本部分主要起草人：陈红英、周欣欣、张燕、姜辉、袁善奎、黄健、瞿唯钢、慕卫、刘潇。 行业标准信息服务平台 NY/T3275.2—2018 化学农药 天敌昆虫慢性接触毒性试验准则 第2部分：赤眼蜂 1范围 本部分规定了化学农药对天敌赤眼蜂慢性接触毒性试验的材料、试验条件、试验操作、数据处理、质 量控制和试验报告的基本要求。 本部分适用于为化学农药登记而进行天敌赤眼蜂慢性接触毒性试验，其他类型的农药可参照使用。 本标准不适用于易挥发 UB 2术语和定义 下列术语和定 适用 2. 1 半致死用量 fian letha me rate 中，S 在急性毒性 试验 式物使用量 注：单位为毫克有效成分再 方厘米(mga gaiihm A 2. 2 meian 半效应用量 ffect application rate 在一定暴露期 内马对 照组相比 赤眼蜂寄生率降低5 %的供试物用量，用 注：单位为毫克有 效成分 平方厘米（mg） m）或克有效成分每公项 CENTE 2.3 供试物 的物质 试验中需要测试 2. 4 R 多次施药因子 m 在多次施药情况 最饮 在作物上 在作物上的初始 浓度的比值，用MAF表 3试验概述 将供试物配制一系列不同浓度的供试药液，分别定量加入玻璃领中制备成均匀药膜管，然后将一定 蛾卵寄生进行其繁殖力影响试验，以供试物对赤眼蜂繁殖力影响的半效应用量ER5及其95%置信限表 征试验结果。 4试验方法 4.1材料和条件 4.1.1供试生物 推荐使用松毛虫赤眼蜂（Trichogrammadendrolimi）成蜂。 4.1.2寄主 NY/T3275.2—2018 米蛾（Corcyracephalonica）卵。 4.1.3供试物 农药原药或制剂。难溶于水的农药用内丙酮等溶剂溶解。 4.1.4主要仪器设备 人工气候箱。 加湿器。 电子天平（精确至0.0001g）。 移液器。 容量瓶。 烧杯。 紫外灯。 玻璃管。 滚管机等。 4.1.5试验条件 温度为（25土2）℃，相对湿度为70%～80%，光照为避光。 4.2试验操作 4.2.1试验用蜂的培养 将被寄生的米蛾卵置于培养箱中培养[温度为（25士2）℃，相对湿度为50%～80%，光照为避光]。 试验用蜂应来源于同一时间、同一批次的寄生卵，使用开始羽化后24h内的成蜂进行试验。 4.2.2米蛾卵卡的制备 开展正式试验之前，取适量当天收集的新鲜米蛾卵均匀黏附于干净的纸片上，然后紫外灯灭菌 15min~20min 4.2.3预试验 4.2.3.1药膜管制备 按照较大的浓度区间至少设置4个供试物浓度处理组，分别将配制好的不同浓度供试物药液从低 浓度至高浓度定量加人预先准备好的每根玻璃管中，将供试药液在玻璃管中充分滚吸直至晾干形成均 匀药膜。并设空白对照组，当供试物使用溶剂助溶时还应设溶剂对照组。对照组和处理组均至少设2 个重复。 4.2.3.2染毒暴露 每个重复至少选取50头赤眼蜂成蜂，利用趋光特性将供试赤眼蜂成蜂转人药膜管中，用黑布封紧 管口，药膜管保持水平放置，在4.1.5的环境条件下爬行染毒暴露24h，期间饲喂20%蜂蜜水（用棉线条 蘸蜂蜜水）。 4.2.3.3观察记录 染毒24h时观察并记录药膜管中存活蜂数和死亡蜂数，求出赤限蜂最高全存活供试物用量与最低 全致死供试物用量，以确定正式试验的供试物用量范围。 4.2.4正式试验 4.2.4.1药膜管制备 根据预试验的结果，按照等比关系至少设置7个梯度正式试验浓度处理组（几何级差应控制在3.2 倍以内，赤眼蜂成蜂死亡率<50%的浓度组至少5个），分别将配制好的不同浓度供试物药液从低浓度 至高浓度定量加人预先准备好的每根玻璃管中（玻璃管内表面积应满足后续繁殖力影响试验与米蛾卵 卡面积的比例要求），将供试药液在玻璃管中充分滚吸直至晾干形成均匀药膜。并设空白对照组，当供 试物使用溶剂助溶还应设溶剂对照组。对照组和处理组均设3个重复。 2 NY/T3275.2—2018 4.2.4.2染毒暴露 每个重复选取（100士10）头赤眼蜂成蜂按照4.2.3.2的方法进行染毒暴露，24h时观察并记录药膜 管中存活蜂数和死亡蜂数，24h死亡率<50%的处理组（至少5个）进行下一步繁殖力测试。 4.2.4.3繁殖力试验 分别在成蜂染毒暴露24h、25h、48h、96h时，每根药膜管中置人含一定数量米蛾卵的卵卡，24h、 25h的蜂卵比例均为1：10，赤眼蜂数为24h暴露后存活蜂数，48h、96h给卵量按24h给卵量递减 30%～40%，每次置人卵卡应保持面积大小一致并叠放，卵卡面积与药膜面积比例应控制在1：10～ 1：5。所有卵卡及存活成蜂按4.2.3.2的方法持续暴露至168h，期间每隔24h饲喂一次20%蜂蜜水。 4.2.4.4观察记录 168h持续染毒暴露结束后，收集对照组和各处理组卵卡分别放人对应标记的干净玻璃管中在同样 的条件下培养24h～96h或至成蜂羽化前，期间应观察卵卡上的寄生卵发育变化情况。当发现卵卡上 的寄生卵多数变黑（被寄生的米蛾卵发育到期为饱满黑色），记录各处理组及对照组黑卵粒数。 4.2.5限量试验 设置上限用量为供试物田间最大施用量乘以多次施药因子（MAF），赤眼蜂在此用量下与对照组比 寄生量降低率<50%时，无需继续进行试验。限量试验中，对照组和处理组至少设置6个重复 MAF按式(1)计算。 1-enxxi MAF- (1) 式中： 农药在植株表面的降解速率常数； 施药次数； n 施药间隔，单位为天（d）； 当缺少任何数据时，MAF可选取默认值3。 降解速率常数k按式（2)计算。 In2 k= (2) DTso 式中： DT50 农药在植株表面的降解半衰期，单位为天（d）。 当缺少DT5o的实测数据时，应采用默认值10d。 准信息服务平台 4.3数据处理 4.3.1单头赤眼蜂寄生量 单头赤眼蜂寄生量按式（3）计算。 P= (3) 式中： 单头赤眼蜂寄生量，单位为粒； 黑卵粒数（为24h、25h、48h96h黑卵粒数总和），单位为粒； N 寄生蜂数（24h存活蜂数），单位为头。 4.3.2寄生降低率 寄生降低率按式（4)计算。 (4) P 式中： 3 NY/T 3275.2—2018 寄生降低率，单位为百分率（%）； -对照组的单头赤眼蜂寄生量，单位为粒； P 处理组的单头赤眼蜂寄生量，单位为粒。 4.3.3半效应用量 按赤眼蜂寄生降低率计算半效应用量ER50。采用合适的统计软件分析试验数据，计算得到供试物 对赤眼蜂繁殖力影响半效应用量ER5及其95%置信限。 4.3.4统计分析方法的选择 LR5o和ERso的计算可采用直线内插法、概率单位图解法或机率值法估算，也可应用有关剂量效应 关系统计学计算软件进行分析和计算 4.4质量控制 质量控制条件包括 PUBL 试验结束时，对照组赤眼蜂单头寄生量 b) c) 5试验报告 试验报 列内容 a) 供试物 的信息 包括 共试物的物理状态及相关理化特性包括通用名化学名称 水溶解度等； 化学鉴定数据（如LAS喜纯度（杂质） 生养品 古系名称来源·培养方式 b) 共证 c) 条件包括 武验 试验期间的环境温度、湿度和光照 采用的 2 为试验 赤眼蜂数； 3 所用装量 验重 复 4) 液和试 剂或分散剂的使月 ENT 法，包 式 d) 结果 1) 据染 存活蜂 6h的寄主卵数和黑卵 数等 2) 试验用量或试验浓度，赤眼蜂L ER，和95%置信限并给出所采用的统计分析 方法； 3) 对照组赤眼蜂是否出现死亡及异常反应： 服务平台 4) 观察到的供试物对赤眼蜂慢 5) 试验质量控制条件描述， 4 NY/T3275.2—2018 参考文 献 [1]GB/T31270.17—2014化学农药环境安全评价试验准则第17部分：天敌赤眼蜂急性毒性试验， ［2JNY/T2882.7—2016农药登记环境风险评估指南第7部分：非靶标节肢动物 [3]王欣，赵丹丹，姚蓉，等，2016.无可观察效应浓度在赤眼蜂慢性毒性研究中的应用[].南京农业大学学报，39（2)： 242-248. ［4]徐企尧，袁根思，1983.米蛾卵繁殖松毛虫赤眼蜂研究初报[J].昆虫知识（6)：268-272. [5JA laboratory method to evaluate the side effects of plant protection products on Trichogramma cacoeciae Marchal (Hymenoptera:Trichogrammatidae).Gui