ICS 65.100 B 17 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T3280.3—2018 病毒微生物农药 棉铃虫核型多角体病毒 第3部分：棉铃虫核型多角体病毒悬浮剂 Virus-basedinsecticides—Helicoverpa armigera nucleopolyhedrovirus(HearNPV)- Part 3:Helicoverpa armigera nucleopolyhedrovirus suspension concentrate(SC) 行业标准信息服务平台 2018-07-27发布 2018-12-01实施 中华人民共和国农业农村部发布 NY/T3280.3—2018 前言 NY/T3280《病毒微生物农药棉铃虫核型多角体病毒》分为3个部分： 第1部分：棉铃虫核型多角体病毒母药； 一第2部分：棉铃虫核型多角体病毒水分散粒剂； 一第3部分：棉铃虫核型多角体病毒悬浮剂。 本部分为NY/T3280的第3部分。 本部分按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本部分由农业农村部种植业管理司提出并归口。 本部分起草单位：农业农村部农药检定所、武汉中科威睿农业科技有限公司、中国科学院武汉病毒 研究所。 本部分主要起草人：类承凤、郭明程、孙修炼、王晓军、肖凤平、张忠信、张楠。 行业标准信息服务平台 NY/T3280.3—2018 病毒微生物农药 棉铃虫核型多角体病毒 第3部分：棉铃虫核型多角体病毒悬浮剂 1范围 本部分规定了棉铃虫核型多角体病毒悬浮剂的要求试验方法、产品的检验与验收以及标志、标签、 包装、储运、安全和保质期。 本部分适用于以病毒包涵体为主要成 药添加适宜助剂加工而成的棉 铃虫核型多角体病毒悬浮剂 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是 必不可少 计用文件 的版本适用于本文 最新版本（包括所有的修改单）适用于本文 GB/T 1601 的测定方法 商品农药验收规则 GB/T1604 品衣药采样方法 GB/T1605 商 包装通贝 GB3796 GB/T4789 食品卫生 GB/T 6682 析实验 空用水 GB/T8170 数值修约 GB/T14825 农药悬浮 测定方送 GB/T16150 95衣 生粉剂细度 GB/T 20813 GB/T28137 GB/T31737 农 3术语和定义 下列术语和定义适用于本 3. 1 棉铃虫核型多角体病毒悬浮剂 leopolyhedrovirus(HearNPV)suspension concentrate(SC) 以棉铃虫核型多角体病毒母药与适宜的载体及分散剂混合均匀的液体制剂。 3. 2 病毒包涵体polyhedralinclusionbody(PIB） 病毒水平传播的主要载体形式，其结构特征是病毒粒子包埋于蛋白质基质的多角体中 3.3 生测效价比 potencyratio 根据药物的药理和对生物体的作用设计试验，比较样品、标准品引起的生物反应，测定药物效价或 其生物学活性。 3. 4 1 NY/T3280.3—2018 菌落形成单位colonyformingunits(CFU） 由单个菌体或聚集成团的多个菌体在固体培养基上生长繁殖所形成的集落。指在琼脂平板上经过 定温度和时间培养后形成的每一个菌落，是计算细菌或霉菌数目的单位。 3.5 杂菌菌落总数numberofmicrobialcontaminants 将棉铃虫核型多角体病毒悬浮剂样品稀释后涂布在琼脂营养培养基上，所得到的微生物（真菌和细 菌）菌落数之和。 4要求 4.1外观 应是可流动、易测量体积的悬浮液体；存放过程中可能出现沉淀，但摇匀应恢复原状，不应有结块。 4.2规范项目及指标 棉铃虫核型多角体病毒悬浮剂还应符合表1的要求。 表1棉铃虫核型多角体病毒悬浮剂控制项目指标 项 目 指标 病毒包涵体含量，PIB/mL ≥标示值 生测效价比（标准品LCso/待测样品LCso），% ≥80 杂菌菌落总数，CFU/mL ≤1.0X107 pH 5.0~7.5 悬浮率，% ≥80 细度（通过75μm试验筛）% ≥95 倾倒后残余物，% ≤3.0 倾倒性 洗涤后残余物，% ≤0.5 持久起泡量（1min后），mL 5试验方法 5.1一般规定 除非另有说明，本标准所用试剂均为分析纯，所述溶液均为水溶液，试验用水为GB/T6682中规定 的三级水。 5.2抽样 按照GB/T1605中液体制剂采样”方法进行，用随机数表法确定抽样的包装件，最终抽样量一般 不少于600mL。 5.3病毒毒种的鉴定 通过提取试样中病毒DNA作为模板，用HearNPVme53基因和dbp基因的特异性引物进行PCR 扩增反应，琼脂糖凝胶电泳检测。当PCR扩增片段大小约为0.5kb时，回收扩增片段，并克隆到T载 体上，用M13通用引物对克隆后的PCR产物进行测序，将测序结果分别与棉铃虫核型多角体病毒（G4 株）的me53基因和dbp基因序列进行比对分析，两者一致性均应该大于98%，即认定试样中的病毒为 棉铃虫核型多角体病毒。 棉铃虫核型多角体病毒有效成分描述参见附录A。棉铃虫核型多角体病毒毒种的鉴定方法按照附 录B的规定。 5.4病毒包涵体含量的测定 5.4.1方法提要 称取少量的病毒试样，用定量的水稀释成水悬浮液，并稀释至适当倍数后，滴加在血球计数板上，在 2 NY/T3280.3—2018 光学显微镜下计数。根据血球计数板上病毒包涵体的数量以及稀释倍数，计算出单位质量（体积）病毒 的数量。 5.4.2仪器、设备 分析天平：精确至0.0001g。 微量移液器：0.1mL~1mL。 容量瓶：10mL。 光学显微镜。 血球计数板及专用盖玻片。 5.4.3测定步骤 5.4.3.1将试样充分振荡摇 后，准确称取 量于10mL容量瓶中，加 释成适当浓度的惠浮液 （最终稀释液使每y格有 水稀释至刻度，取此溶液稀 2个 个病毒包涵体）。 计数时，取洁净的血球计 块，在计数 加盖专用盖玻片： 数板 Q 滴于盖玻片边缘，让悬液 充满计数室，防止 计数池选取4角 及正中央5个中方格病毒包衡体 的总数 S 5.4.4计算 试样中棉铃虫核型多角体病毒包涵体含量 URA ....(1) 式中： 亚 试样 A 数池各 个中方格中病 CEN B 样品稀 希释倍 单位为毫开每克（mlg）： 4X106 母液含 1毫 80 计数 5.4.5允许差 病毒包涵体含量2次 定结果。 5.5生测效价比的测定 春测样品 L0 C的规定 生测效价比（标准品LC 测定方法 5.6杂菌菌落总数的测定 按GB/T4789.2的规定执行。 5.7pH的测定 服务平台 按GB/T1601的规定执行。 5.8悬浮率的测定 取摇匀后试样1.0mL，按GB/T14825的规定进行悬浮率测定。 5.9细度的测定 按GB/T16150—1995中2.2的规定执行。 5.10倾倒性的测定 按GB/T31737的规定执行。 5.11持久起泡性的测定 按GB/T28137的规定执行。 3 NY/T3280.3—2018 6产品的检验与验收 6 应符合GB/T1604的规定。极限数值处理采用GB/T8170中的修约值比较法。 7标志、标签、包装、储运、安全和保质期 7.1标志、标签 应符合GB3796和GB/T20813的规定，注明“低毒”“防曝晒”“防高温”等标志。 7.2包装 应符合GB3796和GB20813中的有关规定 7.3储运 储运过程中应有遮避装置，严防日晒和潮湿 7.4安全 在使用说明书或包装容器上，除有相应的毒性标志外，还应有毒性说明、中毒症状、解毒方法和急救 措施。 7.5保质期 在规定储运条件下，棉铃虫核型多角体病毒悬浮剂的质量保证期从生产日期算起为2年，2年保质 期内，生测效价比和病毒包涵体数量不低于4.2中的指标。 行业标准信息服务平台 NY/T3280.3—2018 附录A （资料性附录） 棉铃虫核型多角体病毒有效成分描述 A.1中文通用名称 棉铃虫核型多角体病毒。 A.2拉丁文学名 HelicoverpaarmigeraNucleopolyhedrovirus，简称HearNPV。 A.3生物学分类 杆状病毒科、Alpha杆状病毒属。 A.4生物学特性 A.4.1形态结构：基本毒粒为杆状，毒粒有囊膜，囊膜内含有一个杆状的核衣壳，核衣壳中含有病毒基 因组。病毒颗粒被包藏在蛋白晶体内形成包涵体（PIB）。光学显微镜下观察，PIB呈强折光性的颗粒； 电子显微镜下观察，PIB呈多面体形状，直径0.5μm~15μm之间。 A.4.2分子结构：杆状病毒基因组为双链、环状DNA分子。 A.4.3包涵体生物学特征：包涵体可以保护病毒颗粒，包涵体非常稳定，对细菌、热和许多化学物质包 括低pH有抵抗，使其在土壤中可以存活多年。 A.4.4宿主范围及传播机理 本产品系通过自然界中分离棉铃虫核型多角体病毒毒株，使其在活体宿主昆虫中扩增、分离纯化而 成。该产品对棉铃虫有特效，对其他生物安全，特别对人类和家畜等脊椎动物及鸟类无害。本品低毒。 病毒包涵体经害虫取食叶片进人目标害虫体内，在虫体内大量复制增殖扩散，急剧吞噬消耗虫体组 标准信息服务平台 织，导致害虫染病后组织细胞液化而亡，并通过死亡虫体的体液、粪便在害虫之间继续传播，形成流行性 昆虫病毒病，药效持久。 A.5有效成分主要存在形态 棉铃虫核型多角体病毒包涵体。 A.6生物活性 杀虫。 A.7溶解性 不溶于水，溶于弱碱。 A.8稳定性 在4℃以下可以长期保存，加工过程中处理温度不得高于60℃，在弱碱溶液、100℃以上高温条件下 极快丧失生物活性。见光易丧失生物