ICS65.100 B 17 NY 中华人民共和国农业行业标 NY/T 3282.2—2018 真菌微生物农药 金龟子绿僵菌 第2部分：金龟子绿僵菌油悬浮剂 Fungal pesticides-Metarhizium anisopliae- Part 2:Metarhizium anisopliaeoil miscible flowable concentrate(OF) 行业标准信息服务平台 2018-07-27发布 2018-12-01实施 中华人民共和国农业农村部发布 NY/T3282.2—2018 前 言 NY/T3282《真菌微生物农药金龟子绿僵菌》分为3个部分： 第1部分：金龟子绿僵菌母药； 第2部分：金龟子绿菌油悬浮剂； 第3部分：金龟子绿僵菌可湿性粉剂。 本部分为NY/T3282的第2部分。 本部分按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本部分由农业农村部种植业管理司提出并归口。 本部分起草单位：农业农村部农药检定所、重庆大学、重庆重大生物技术发展有限公司。 本部分主要起草人：王晓军、王中康、杨峻、殷幼平、郭明程、李向英、胡丽。 行业标准信息服务平台 I NY/T3282.2—2018 真菌微生物农药金龟子绿僵菌 第2部分：金龟子绿僵菌油悬浮剂 1范围 以及标志、标签、包装、储运、安全和保质期。 本部分适用于由分生孢子母药添加适宜植物油或油类介质并加人适量表面活性剂，经高速搅拌混 合过滤而成的金龟子绿僵菌油悬浮剂。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件 GB/T191包装储运图示标志 GB/T1601农药pH值的测定方法 GB/T1604 商品农药验收规则 GB/T1605商品农药采样方法 GB3796农药包装通则 GB/T8170—2008数值修约规则与极限数值的表示和判定 GB/T31737农药倾倒性测定方法 NY/T3282.1真菌微生物农药金龟子绿僵菌第1部分：金龟子绿僵菌母药 3术语和定义 NY/T3282.1界定的以及下列术语和定义适用于本文件。 3. 1 绿僵菌油悬浮剂 oilmiscibleflowableconcentrate(OF) 由金龟子绿僵菌母药与适宜植物油或油类介质经混合而成的均匀分散的液体制剂。 3.2 悬浮率suspensibility 油悬浮剂经油性稀释剂稀释混匀后，悬浮液中有效成分真菌分布的含孢量占总含孢量的百分率。 4要求 4.1组成和外观 本产品由绿僵菌孢子母药和植物油或石蜡油加工而成，为黑色黏稠的油状液体，在存储过程中会有 少量沉淀，经摇动应能恢复悬浮状态，不应有絮状结块 4.2规范项目及指标 金龟子绿僵菌油悬浮剂应符合表1的要求。 NY/T3282.2—2018 表1金龟子绿僵菌油悬浮剂控制项目指标 项 目 含孢量，亿孢子/ml ≥80 活孢率，% >85 杂菌率，% ≤5 细度湿筛试验（通过175μm标准筛），% >90 悬浮率，% ≥80 倾倒后残余物，% ≤10.0 倾倒率 洗涤后残余物，% 0'> pH 5.5~7.0 储存稳定性，% >80 定期检测项目：每6个月测 次 5试验方法 5.1一般规定 除非另有说明 别为化学纯及以上，所 .试 5.2抽样 按照GB/ 定进行样品的采集， 有随机数表法确定抽样白 05 的规 最终 抽样量不少于 500mL采样时， 立特别注 意样品的代表性和避免污染。 采集容器和采样 采集后应立即检验 ，若水 立即检验应密封保存 5.3鉴别试验 形态学特征 划线或稀释涂布法将石蜡油稀释样品在萨氏培养基 纯化培养，观 察菌落形态颜色 或色素 现察菌丝体、 、产抱梗租分生孢子并测 比近源绿僵菌 见附录A。 的形态学特征描 述进行 一般仅对绿佳 雷菌母 如有必 离 纯化后再按照 NY/T3282. 附录 5.4含孢量测定 5.4.1方法提要 羊色子 将试样润混并稀释至适当倍数 采用玻璃纸片 数测 学显微镜下用血 后仕算试样中 球计数板计数孢子数 全包量 5.4.2试剂和溶液 液体石蜡油或煤油。 5.4.3仪器及设备 务平台 高速匀浆器：转速≥1000r/mi 光学显微镜：目镜×物镜=400倍。 亮线血球计数板：25×16。 微量移液器：0.2mL~1.0mL。 手动计数器：1~9999。 容量瓶：100mL。 三角瓶：250mL。 5.4.4试验步骤 5.4.4.1将试样搅拌均匀后，准确吸取试样V（约1.0mL)2份，分别进行以下操作。 5.4.4.2将试样置于洁净三角瓶中，加人液体石蜡油60mL制成孢子悬浮液，并在高速匀浆器中混合 2 NY/T3282.2—2018 均匀后，转移至100mL容量瓶中定容、摇匀，配制成A悬浮液（稀释100倍）。 5.4.4.3用移液器准确吸取1.0mLA悬浮液至100mL容量瓶中，用液体石蜡油稀释至100mL（再稀 释100倍），并在高速匀浆器上混合均匀后备用。 5.4.4.4在血球计数板上盖好盖玻片后，用微量移液器吸取孢子悬浮液，沿盖玻片上下边缘渗人盖玻 片下，使其刚好充满盖玻片与计数板记数区域之间。应无气泡，且计数区域四周无液体；如有多余液体， 可用吸水纸吸去。 5.4.4.5用显微镜观察，待孢子静止后进行计数。在规划格区内，采取对角线5点取样的计数方法计 数，上下区域各5个中格（16个小方格/中方格），即双线范围内160小格（计数时，对于中格四周如有压 线的孢子，计上双线不计下双线，计左双线不计右双线）的绿菌孢子数。 5.4.4.6每份试样点样、计数p次（p=2）。 5.4.5测定结果 试样中的含孢量W按式（1)计算。 KX400XN 5N1 .（1) 4V 式中： W 试样中的含孢量，单位为亿孢子每毫升（亿孢子/mL）； Ki 稀释倍数（10000倍）； Ni p次计数的总孢子数（上下区域各5个中方格中计数的总孢子数）； 400 血球计数板计数室小方格总数为25×16=400； 0. 1 血球计数板计数室体积，单位为立方毫米（mm）； 10-3 立方毫米换算为毫升（mL）的倍数； 160 血球计数板上下区域各5个中方格的小方格的总数（5×16×2=160）； P 计数次数（2次）； Vi 试样量，单位为毫升（mL）； 108 代表108个孢子每毫升，即亿孢子/mL。 5.4.6允许差 2次平行测定结果相对差，应不大于20%，取其算术平均值作为测定结果。 5.5活孢率测定 金龟子绿僵菌油悬浮剂活孢率测定按照附录B的规定进行。 5.6杂菌率测定 采用液体石蜡油对油悬浮剂样品进行适当稀释后，按照本部分5.4的方法测定并计算样品的杂 菌率。 5.7细度测定（湿筛法） 5.7.1方法提要 用煤油按比例稀释油悬浮剂，倒人用润湿试验筛中，将试验筛置于盛煤油的容器中，反复洗涤，移除 筛中残余物，干燥，称重，计算绿菌样品的细度。 5.7.2试剂 煤油。 5.7.3仪器及设备 试验筛：孔径175μm。 电子天平：精度为0.001g。 电热恒温干燥箱：控温误差士2℃。 3 NY/T3282.2—2018 烧杯：250mL。 烧杯：100mL。 干燥器。 玻璃棒。 5.7.4试验步骤 将试验筛浸人盛有煤油的盆中，使网筛完全润湿。准确称取混合均匀的试样100g（精确至 0.001g），置于干燥的250mL烧杯中，用煤油稀释5倍并混匀，缓慢倒入试验筛中。用煤油洗涤烧杯3 次，洗涤液也倒入试验筛中。将试验筛浸入煤油中（始终保持筛缘在液面之上），左右摆动儿次后提起试 验筛，反复浸入和提起试验筛30次。更换煤油再如上操作，反复浸入和提起试验筛。将试验筛连同残 余物放入烘箱中（100士2）℃烘至恒重，取出置于干燥器中冷却至室温，称重。 5.7.5测定结果 油悬浮剂的悬浮物细度W2按式（2）计算。 (2) mi 式中： W2 油悬浮剂的悬浮物细度，单位为百分率（%）； mi 试样的质量，单位为克（g）； 残余物的质量，单位为克（g）。 5.7.6允许差 2次平行测定结果相对差，应不大于20%，取其算术平均值作为测定结果。 5.8悬浮率测定 按GB/T14825的规定进行测定。 5.8.1方法提要 将试样于具塞量筒中，在（30土2）℃恒温箱内静置30min后，通过分别测定底部1/10悬浮液与上 悬浮液的含孢量，计算绿僵菌样品的悬浮率。 5.8.2仪器及设备 三角瓶：250mL。 尔准信息服务平台 磨口具塞玻璃量筒：250mL（内径38.5mm~40mm，刻度间距20.0cm~21.5cm，250mL刻度线 与瓶塞底部间距4cm~6cm）。 真空泵。 恒温箱：控温误差士2℃ 光学显微镜：目镜×物镜一400倍。 高速匀浆器：转速1000r/min。 亮线血球计数板：25×16。 微量移液器：0.2ml~1.0mL。 手动计数器：1~9999。 5.8.3试验步骤 将250mL试样充分摇匀后倒入250mL具塞量筒，盖上瓶塞在1min内上下颠倒30次，使之充分 均匀。直立量筒，打开塞子，用微量移液器快速从量筒中取样（1mL），用于测定悬浮液的含孢量c1（方 法参照5.4），再将具塞量筒放人（30土2）℃超级恒温器中静止恒温30min。轻轻取出，并用一接有真空 泵的吸管将瓶中菌液由上液面逐渐向下吸出224mL，盛于三角瓶中（此为上悬液），控制整个操作过程 在15s～30s内完成。量筒中所剩孢子悬浮液为下悬液，测定量筒底部剩余的25mL悬浮液，参照5.4 4 NY/T3282.2—2018 的方法测定其含孢量c2，计算悬浮率。