ICS 65.020 B 17 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 3273—2018 难处理农药水生生物毒性试验指南 Guidance document on aquatic toxicity testing of difficult pesticides 行业标准信息服务平台 2018-12-01实施 2018-07-27发布 中华人民共和国农业农村部发布 NY/T3273—2018 前 言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由农业农村部种植业管理司提出并归口。 本标准起草单位：农业农村部农药检定所、浙江省农业科学院农产品质量标准研究所。 本标准主要起草人：俞瑞鲜、袁善奎、胡秀卿、吴声敢、陈朗、于毅、赵秀振、门兴元。 行业标准信息服务平台 NY/T3273—2018 难处理农药水生生物毒性试验指南 1范围 本标准规定了供试物稳定性的初步评估、试验药液制备和暴露体系选择、样品采集及试验结果的计 算与表达等的基本要求。 本标准适用于难溶（或略溶）于水、低浓度时表现毒性、易挥发、易降解、易被吸附、有颜色、疏水性、 规范性引用文件 ARD 下列文件对于本 件的 应用是必 日期的 日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的 （包括所有的修改单 GB/T21828 学品 型泽繁殖试 化 类早期生活阶段毒 GB/T2185 全试 GB/T3127 药环境安全评价试验 部分·鱼类 式验 准 化 衣药环境安全评价试验 部分类急 制试验 GB/T31270 农药环境安全评价试 第14部分藻类生长 GB/T31270 准 化甲农 NY/T3089 验 化学衣 NY/T3090 NY/T3274 化学农 3术语和定义 下列术语和定 3. 1 diff m 难处理农药 试验过程中难以 难 分析要求的化 3.2 化学农药 chemicalpesticide 利用化学物质人工合成的农药 其中有司 活性物 母体，进行仿制、结构改造， 创新而成，为仿生合成农药。 服务平台 同义词：有机合成农药 syntheticorganicpesticide [NY/T1667.1—2008,定义2.3.1] 3. 3 农药制剂 formulation product 由农药原药（或母药）和助剂制成使用状态稳定的产品。 [NY/T1667.2—2008,定义2.4] 3. 4 供试物 test substance 试验中需要测试的物质。 3.5 1 NY/T3273—2018 难溶（或略溶）于水的物质poorly（orsparingly）water-solublesubstance 在水中的溶解度小于100mg/L的物质。 3.6 直接添加法directaddition 把供试物直接加人到水中，加以混合保证它完全分散和溶解在水中。 3.7 多组分供试物multi-componentsubstances 由不同溶解性、不同理化性质的物质所组成的混合物。 3.8 疏水性供试物hydrophobicsubstances 正辛醇-水分配系数（Kow）达到logKow>4的供试物或生物富集系数（BCF）>500的供试物。 3. 9 水融合部分water-accommodatedfraction（WAF） 一种多组分供试物或混合物在水中的分散总和，包括溶解的部分和/或悬浮的部分和/或乳化的 部分。 4 供试物稳定性的初步评估 供试物的稳定性评估方法参见附录A。 5试验药液制备和暴露体系选择 5.1难溶（或略溶）于水的供试物 5.1.1试验药液的制备 5.1.1.1直接添加法 直接添加法适用于供试物的暴露浓度小于其水中溶解度50%的试验。根据强度递增的顺序，直接 添加法包括低能量搅拌、剧烈振荡、搅拌、匀浆/高速搅拌、超声波助溶。 根据供试物的性质，低能量搅拌通常持续24h～48h；超声波助溶时间以30min为宜，并须注意 水中溶解氧是否减少及超声加热对农药稳定性的影响。 5.1.1.2水溶性溶剂助溶法 水溶性溶剂助溶法适用于易水解和高黏性的供试物，不适用于混合物的试验药液制备。 可使用丙酮、乙醇、甲醇、二甲基甲酰胺或三甘醇作为溶剂。静态或半静态试验时，须注意丙酮、乙 醇、甲醇等溶剂使用后微生物生长而造成溶解氧下降的情况。试验溶液中溶剂的浓度不超过对应试验 条件下溶剂的毒性阈值。溶剂的浓度应符合相关试验准则的要求，通常至少比供试物的无观察效应浓 度低一个数量级或低于100mg/L（或0.1mL/L）。 5.1.2不溶物的去除 可采用以下方法分离不溶于水的供试物，宜优先采用离心法。 a）离心法：在100000m/s2~400000m/s（10197×g~40789×g）的转速下离心30min b）滤膜过滤法：使用孔径为0.22μm~0.45μm的惰性材料滤膜过滤，滤膜在使用前先用高纯水 润洗，然后再用试验药液润洗。 5.1.3流水式暴露系统 如供试物浓度在试验过程中不能保持理论浓度的80%~120%，可使用流水式暴露系统。 使用流水式暴露系统时，常配制某一浓度的母液，经过稀释将不同暴露浓度泵人不同处理组。如试 验过程中无法达到处理组的目标浓度，则需预先配制系列浓度母液，且配制量应满足24h或者更长试 2 NY/T3273—2018 验时间所需。 5.1.4饱和状态下未表现急性毒性的供试物 评估饱和状态下的供试物毒性效应时，应提供以下材料： 饱和试验药液制备方法报告； a) b） 试验药液制备过程的详细描述； 供试物的水溶解度； d）饱和溶液的评估。 当使用饱和溶液未观察到供试物对非靶标生物的毒性效应时，应在试验报告中说明在饱和状态时 无毒性效应。 5.2低浓度时表现毒性的供试物 PUBL 对于低浓度时表现出 方法进行： 试验溶液的制 和不溶物的去除参照5 a) b) 当缺少可满 用半静 选 验 衣度的儿 试验期间供 浓度显著 下降 超过初始浓度20%）时， 何平均值来评估毒性 c) 试物 效应； d) 供试物浓 发生沉演 度损失过程时宜用损失后的测定浓度算术平 试验结 ，若供试 e) 时 浓度检 前提下 平均暴露浓度的计算按 外理 1) 检 2) 检出 共试物值 量限的12作为试验的 5.3易挥发的供试物 供试物 重减水顶空体积。不同 对于易挥发的 浓度的试验药液宜 M 不同试验的操 求女 推荐范 a）鱼类试驴 内使用尺寸较 提高试验药液更新 静态诗 小的鱼，或 大验 流水试验时） 以满足溶解 于21d密团繁殖 多除紧殖白 蚤应与更换培养基 b）大型遥繁殖证 YGR 同时进行。 藻类试验（GB/T 70.14：使 暴露系统进行藻类生长抑制试验时，降低藻类细胞接种 c) 密度，并在试验培养基中加人更多的酸氢钠，或采用可以持续 应CO的循环装置，或适当 缩短试验周期。试验开始前宜进行预试验，以保证所选择的 为暴露系统可满足试验中对照组的 服务平台 藻类生长要求。 5.4易降解的供试物 5.4.1母体与分解产物的毒性测定 对于静态和半静态试验（24h更换试验药液）： 半衰期≥3d，测定母体的毒性。 a) b) 1h<半衰期<3d，根据实际情况，还可包括降解产物毒性的测定。 半衰期<1h，测定降解产物的毒性。 d) 当预试验或定量构效关系（QSAR)分析表明，任何降解产物的毒性与母体相似或高于母体时， 测定降解产物的毒性。降解产物的毒性试验应单独进行，并建立降解产物的分析方法。 样品的采集和分析过程应保证母体不再进一步分解。 3 NY/T3273—2018 5.4.2易光解的供试物 对于易光解的供试物，短期的鱼类急性毒性试验和泽类毒性试验可在黑暗环境下或者采用红光光 源进行试验，也可选择性地剔除造成光解的特定波长的光线。对长期进行的慢性试验，不应在完全黑暗 的条件下进行试验。 藻类试验可从下列方法中选择一种来测定供试物母体的毒性： a）剔除造成供试物光解的波长的光线，同时保留光合作用波长的光线； b）采用黑暗暴露和光照暴露交替进行试验。 5.4.3易水解的供试物 宜采用直接添加法，并采取措施使其快速溶解，以尽可能缩短供试物试验药液的配制过程。若配制 储备液时，宜采用非反应性、与水混溶的溶剂 可水解形成聚合物的供试物（如烷氧基硅氧烷和异氰酸酯或盐）不适于流水式暴露系统。试验时， 将此类供试物直接加到试验容器中并剧烈搅拌，然后尽可能快速而安全地加人试验生物，如10min。若 因供试物不溶而难以形成均匀相时，需在搅拌前使用非反应性溶剂进行稀释，再进行添加和搅拌。 为了保持供试物母体在试验药液中的浓度，可在试验允许的范围内对温度和pH等进行调整。必 要时，测定pH对水解速率的影响，用以确定试验用水解产物的生产条件。水解产物的毒性试验应在标 准要求的pH范围内进行。 5.4.4易氧化分解的供试物 对于易氧化分解的供试物，开展鱼类和无脊椎动物试验时，关键是要保证水中溶解氧符合试验要 求。可采取以下方式保持水中溶解氧浓度：对试验药液曝气、增加试验药液体积、减少试验生物承载量、 增加试验药液更换频率等。 5.4.5易生物降解的供试物 对于易生物降解的供试物，可采用半静态试验或流水式试验方法。半静态试验中，在试验开始时和 试验期间应对试验容器进行灭菌。流水式试验中，高浓度储备溶液宜在氮气中保存。试验过程中，应避 免使用抗生素。必须使用抗生素时，需经委托方同意，并增加抗生素对照组。 5.5易被吸附的供试物 对于易被吸附的供试物，当暴露浓度<1mg/L时，可采用以下方法减少供试物在暴露系统表面和 有机物上的吸附： a）减小试验药液